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培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
下列是產品的訂購信息:
產品名稱 | K562細胞,慢性髓原白血病供應商 |
英文名稱 | K562 cells, chronic myelogenous leukemia |
貨號 | EY-X63405 |
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
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實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
雜質C CAS 規格:50mg 訂購|咨詢
5-O-甲基維斯阿米醇苷;5-O-Met CAS 84272-85-5 規格:20mg 訂購|咨詢
太子參環肽B CAS 規格:10mg 訂購|咨詢
δ-3異構體 CAS 規格:50mg 訂購|咨詢
祖師甲素 CAS 規格:20mg 訂購|咨詢
3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[ CAS 366814-43-9 規格:HPLC≥98%;5mg/支 訂購|咨詢
4-甲氧基水 CAS 673-22-3 規格:20mg 訂購|咨詢
阿苯唑 CAS 54965-21-8 規格:100mg 訂購|咨詢
莪術醇;姜黃醇 CAS 4871-97-0 規格:HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
山柑 CAS 6873-15-0 規格:HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
灰氈毛忍冬皂苷乙 CAS 136849-88-2 規格:20mg 訂購|咨詢
K562細胞,慢性髓原白血病供應商磷酸化組蛋白H1抗體 英文名稱:phospho-Histone H1.4 (Thr146) 0.1ml
HEATR4蛋白抗體 英文名稱:HEATR4 0.2ml
透明質酸及粘蛋白1抗體 英文名稱:HAPLN1 0.2ml
轉錄因子HES7抗體 英文名稱:HES7 0.2ml
宮頸黏液蛋白相關蛋白抗體 英文名稱:HIP55/DBNL 0.2ml
流感病毒H3N7血凝素抗體 英文名稱:H3N7 hemagglutinin 0.2ml
流感病毒H3N8血凝素抗體 英文名稱:H3N8 hemagglutinin 0.2ml
流感病毒H3N1血凝素抗體 英文名稱:H3N1 hemagglutinin 0.2ml
同源盒蛋白HoxB3抗體 英文名稱:Hoxb3 0.2ml
遺傳性血色病蛋白相關蛋白1抗體 英文名稱:HFE 0.2ml
甘油吸收/轉運蛋白GUP1抗體 英文名稱:HHATL 0.2ml
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