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當前位置:上海一研生物科技有限公司>>科研細胞>>細胞系>> L-MTK細胞,鼠胸腺激酶缺陷細胞株說明書
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所 在 地上海市
更新時間:2021-03-29 14:33:46瀏覽次數(shù):498次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
下列是產(chǎn)品的訂購信息:
產(chǎn)品名稱 | L-MTK細胞,鼠胸腺激酶缺陷細胞株說明書 |
英文名稱 | L-MTK cells, mouse thymidine kinase deficient cell strain |
貨號 | EY-X64199 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
MG-63(人骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2gersion
人回盲腸細胞出芽短梗霉=出芽茁霉 Aureobasidium pullulans
產(chǎn)黃青霉 Penicillium chrysogenumEBTr (NBL-4) (牛胚氣管細胞)
小鼠腮腺細胞*培養(yǎng)基100mL
人口腔上皮細胞KB
H4-IIE(大鼠肝細胞 )5×106cells/瓶×2
NCI-H2087(人非小細胞肺腺細胞)5×106cells/瓶×2gersion
WM35, 人黑色素瘤細胞小鼠腎上皮細胞*培養(yǎng)基
串珠菌 Leuconostoc lactisCoC1(人卵巢細胞)
769-P(人腎細胞腺細胞)球形節(jié)桿菌 Arthrobacter globiformis
TMB Kit/TMB底物顯色試劑盒(可溶型)100ml100ml
L-MTK細胞,鼠胸腺激酶缺陷細胞株說明書兔子β內(nèi)啡肽Beta-EP (Rabbit Beta-Endorphin) ELISA Kit 96T
小鼠神經(jīng)絲蛋白Mouse neurofilament protein,NF ELISA Kit 96T
魚磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶AMPK ELISA Kit 96T
E Fc段受體ⅡFc Epsilon R II /CD23(Human Receptor II for the Fc region of immunoglobulin E,Fc Epsilon R II ) ELISA Kit 96T
大鼠抗紅細胞抗體RBC(Rat anti-red cell antibody )ELISA Kit 96T
魚卵黃高磷蛋白PV ELISA Kit 96T
G Fc段受體ⅢFc GammaR III /CD16(Human Receptor III for the Fc region of immunoglobulin G,Fc GammaR III ) ELISA Kit 96T
兔核因子κB亞基p65親和肽NF-KapB p65 (Rabbit nuclear factor-KapB p65) ELISA Kit 96T
乙型肝炎二對半全套 96T
大鼠CD3分子CD3(Rat Cluster of differentiation 3,CD3) ELISA Kit 96T
小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體Mouse small nuclear ribonucleoprotein,snRNP/Sm ELISA Kit 96T
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