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規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 貨號 | EY-XY3901 |
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組織來源 | 胸腺組織 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
細胞簡介:
是機體重要的器官。其功能與緊密相關,是 T細胞分化、發育、成熟的場所,還可以分泌及類物質,具有技能的器官。
的表面有結締組織被膜,結締組織伸入實質把分成許多不分隔的小葉,這些結締組織組織是由成纖維細胞構成,其作為支持細胞,對其他細胞起保護和支持作用。
產品名稱 | 組織來源 | 胸腺組織 | |
英文名稱 | Rabbit primary thymic fibroblasts | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
細胞特性:
1)組織來源于實驗動物的正常組織。
2)細胞鑒定:纖維連接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式:長梭形細胞,不規則細胞,貼壁培養。
推薦培養基:
我們推薦使用 DELF 原代 成纖維 細胞培養體系 作為體外培養的培養基。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養基重懸細胞,并接種到新的培養瓶或培養皿中,置于培養箱中進行培養。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1:2傳代 。
9.注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
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