白堊立克次氏體PCR試劑盒步驟注意事項：
1．基礎程序；
2．擴增溫度和延伸溫度；
3．反應時間；
4．循環次數；
5．PCR 反應液的配制；
6．PCR技術的基本原理；
7．PCR的反應動力學；
8．PCR擴增產物；
9．PCR反應體系與反應條件。

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以下是白堊立克次氏體PCR試劑盒步驟的詳細說明書：

使用方法：
注：白堊立克次氏體PCR試劑盒步驟所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區）
取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區。
2.加樣（樣本處理區）
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區。

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 原代內皮細胞培養特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml

IL20RB Others Rat 大鼠 IL20RB 人細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠子宮平滑肌細胞*培養基 100mL

CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell subline F-12K+10%FBS

胰島素樣生長因子

E.G7-OVA(小鼠T淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人卵巢成纖維細胞HOF

RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞 Rattus

CM-H048人胃粘膜上皮細胞*培養基100mL

大鼠腦膜細胞(RMC)(5×105)

小鼠神經母細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] 小鼠卵巢顆粒細胞*培養基 100mL

人肝永生化細胞;THLE-3

FGFR1 Others Mouse 小鼠 FGFR1 / CD331 人細胞裂解液 (陽性對照)

人腸靜脈內皮細胞*培養基   100mL

人小腸平滑肌細胞*培養基   100mL

人結腸平滑肌細胞*培養基   100mL

人直結腸平滑肌細胞*培養基   100mL

卵黃多粘菌素瓊脂基礎（MYP）  英文名稱；  Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base  規格；  250g

胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎  英文名稱；  Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base  規格；  250g

改良V-P培養基  英文名稱；  V-P Medium,Modified  規格；  250g

胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎  英文名稱；  Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base  規格；  250g

酪蛋白瓊脂  英文名稱；  Casein Agar  規格；  250g

假單胞cfc選擇性培養基  Pseudomonas CFC Selective Agar  250g

可溶性淀粉培養基  Soluble Starch Medium  250g

AK瓊脂（2號）  AK Agar（No.2）  250g

牛肝顆粒    100g

運動發酵單胞菌T培養基  Zymomonas Mobilis T Medium  250g

白堊立克次氏體PCR試劑盒步驟RVS肉湯  用于食品中沙門氏菌檢驗選擇性增菌(ISO標準)用途:用于沙門氏菌的選擇性增菌培養。用法稱取本品 27.1g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,充分混勻,分裝,121℃高壓滅菌 15 分鐘,保存于 4 -10℃冰箱,備用。注:放置于 42℃水浴培養。

MKTTn肉湯（ISO）  用于食品中沙門氏菌檢驗選擇性增菌(ISO標準)用途:用于食品中沙門氏菌選擇性增菌培養。用法稱取本品 89.5g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,迅速冷卻,此溶液在 2-8℃可保存 4 周,臨用前加入 20ml液(5g 溶解于 2ml蒸餾水,然后加入 4g ,加蒸餾水至 20ml),混勻,分裝試管,每管 10ml,當天制備當天使用,無需高壓滅菌。

賴氨酸鐵瓊脂（LIA）  用于食品中沙門氏菌生化試驗(FDA標準)用途:用于同時檢測腸桿菌科細菌的賴氨酸脫羧酶和產試驗,特別用于檢測沙門氏菌和亞利桑那菌。用法稱取本品 32.0g ,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝于 13x100mm 試管中,每管4ml。121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至 60℃時,制成斜面,斜面長 2.5cm,底部長 4cm。

改良MSRV培養基  用于沙門氏的分離培養（MERCK方法）用于沙門氏的分離培養（MERCK方法）產品用法：稱取本品 32.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,煮沸1 分鐘,冷至 50℃左右時, 每 200ml 培養基中加 1 支改良 MSRV 添加劑(新生霉素 2mg),混勻,傾入無菌平皿,備用。使用時,正置培養,采用點觸法接種。注：無需高壓滅菌。貯存方法：請放置陰涼干燥處保存

需要自備的器材：
1．白堊立克次氏體PCR試劑盒步驟儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經過優化，特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結果。