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實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肝癌細胞;Hep-3B[Hep3B] | 貼壁生長 | EY-X63622 |
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細胞名稱 肝癌細胞;Hep-3B[Hep3B]
形態特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: Hep-3b細胞建系于1979年。該細胞產生甲胎蛋白(alpha-fetoprotein)、乙肝表面抗原(BHsAg)、白蛋白、巨球蛋白、α-抗(alphal-antitrypsin)、轉鐵蛋白、補體(C3)、C3活性載體,纖維原等,具有廣泛的研究價值。Hep-3b為貯存細胞系,僅限于研究使用,不能用于商業目的。
培養條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C155
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 中國倉鼠卵巢癌細胞;CHO-9618s MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 中國倉鼠卵巢癌細胞;CHO-NIDVD MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 雜交瘤細胞株;AHD-6A7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Homo sapiens, human細胞名稱: 雜交瘤細胞株;09199 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mus musculus, mouse細胞名稱: 雜交瘤細胞株;CyHv-2-ORF72-D8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Wallemia sebi (Fries) von Arx細胞名稱: 雜交瘤細胞株;PEDV-J11E MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK21-XF-C13 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK21-XF-C02 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Gyrodon lividus (Bulliard : Fries) Saccardo細胞名稱: 猴胎腎細胞;Marc-145XF MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mus musculus, mouse細胞名稱: 人胃印戒細胞癌細胞株;GC-006-03 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces paradoxus Bachinskaya, teleom ..細胞名稱: 犬腎細胞;MDCK-C65 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Penicillium glandicola (Oudemans) Seifert e ..細胞名稱: 犬腎細胞;MDCK-C09 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 雜交瘤細胞株;HR03211-7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱:中低分化結腸癌細胞株;CC-006cpm8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Phytophthora sansomeana Hansen et Reeser細胞名稱: 雜交瘤細胞株;H3N2-CIV-NP-2D10 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Salmonella enterica subsp.indica (Le Mi ..細胞名稱: 雜交瘤細胞株;HR00153 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
肝癌細胞;Hep-3B[Hep3B]人活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒β-TGELISAKit產品規格:48T/96T。
人白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒β-TGELISAKit產品規格:48T/96T。
人(cAMP)ELISA試劑盒β-TGELISAKit產品規格:48T/96T。
人血管緊張素轉化酶(ACE)ELISA試劑盒β-TGELISAKit產品規格:48T/96T。
人血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒γ-ECSELISAKit產品規格:48T/96T。
人角化細胞內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)ELISA試劑盒κ-IgLCELISAKit產品規格:48T/96T。
人血管生長素(ANG)ELISA試劑盒λ-IgLCELISAKit產品規格:48T/96T。
人血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒產品規格:48T/96T。
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