人ELISA試劑盒

人ELISA試劑盒檢測原理：

信裕生物生產(chǎn)的ELISA試劑盒采用抗體夾心法:將抗人抗體包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的人與抗體結(jié)合，加入生物su化的抗人抗體，再加入ABC復(fù)合物與生物su抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，然后加入TMB顯色底物，顯色劑顯藍(lán)色，加終止液變黃色，游離的成分被洗去。在450 nm處測OD值，人濃度與OD值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中的濃度。

檢測范圍：0.156-10ng/ml

靈敏度：0.094ng/ml

標(biāo)本收集與試劑準(zhǔn)備:

1、血清、血漿樣本收集應(yīng)使用一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本，標(biāo)本懸浮物應(yīng)離心去除，使標(biāo)本清澈透明。待測樣本應(yīng)盡早檢測，2-8℃保存48小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復(fù)凍融。

2、洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）

3、標(biāo)準(zhǔn)品配制：取7個(gè)1.5ml離心管，分別標(biāo)注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從至七管中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液300ul。在一管中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul（標(biāo)準(zhǔn)品濃度），置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第六管中吸出300ul棄去，第七管為空白對照。(建議標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank)。

4、生物su化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物su化抗體稀釋液將100×生物su化抗體稀釋成1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當(dāng)日使用，剩余棄之。

5、ABC復(fù)合物工作液配置:使用前20分鐘，用ABC復(fù)合物稀釋液將100×濃縮ABC復(fù)合物稀釋成1×工作液，當(dāng)日使用，剩余棄之。

6、如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品值，建議重新檢測，請根據(jù)實(shí)際情況，適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。

檢測程序:

1、微孔板使用前洗板2次，向?yàn)V紙印干后，請立即使用。

2、加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板混勻后置37℃，90分鐘,然后甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，向?yàn)V紙上印干，不洗板。

3、每孔加入1×的生物su化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，60分鐘。

4、洗板：用洗滌液將微孔板充分洗滌3次，向?yàn)V紙上印干。

5、每孔加入1×的ABC復(fù)合物工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。

6、洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌5次，向?yàn)V紙上印干。

7、每孔加入底物工作液90ul，混勻后置37 ℃暗處反應(yīng)3-20分鐘（具體顯色時(shí)間根據(jù)顯色結(jié)果而定）。

8、每孔加入50ul終止液，混勻，30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果判斷與計(jì)算：

1、所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算，如空白OD低于0.1，也可以直接計(jì)算。

2、以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。

注意事項(xiàng):

1、在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時(shí)建議作雙孔檢測，每次檢測都應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2、洗滌過程很關(guān)鍵，洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象，37℃水浴使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。

3、檢測時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2 個(gè)月內(nèi)用完。

4、試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會(huì)出現(xiàn)絮狀物，屬正常現(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。

5、僅用于科研，不能用于臨床診斷！