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ELISA試劑盒樣本的重要性

閱讀:78發(fā)布時間:2015-12-6

  ELISA酶聯(lián)免疫吸附,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法簡單,方便,靈敏,特異性強不需要特殊設(shè)備(只需要酶標儀就可以),所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。

      影響ELISA測定因素有很多,而其操作中需要有一定的技術(shù)要求,如操作手法,環(huán)境,樣本等,有時??梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)等,樣本的重要性關(guān)系到整個實驗的結(jié)果,上海極威生物為大家解讀ELISA檢測的影響因素之一-樣本的影響

1、樣本的保存在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性;為避免上述問題,ELISA試劑盒測定血清標本時能新鮮采集;如果不能立即測定,根據(jù)相應(yīng)的時間保存相應(yīng)的溫度,5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應(yīng)-20℃低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強烈振蕩。

2、樣本的時間:因為塑料試管能吸附抗原物質(zhì),所以樣本長時間放在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。的方法是使用真空*;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。

3、樣本受細菌污染因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,可能會產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

4、樣本的凝固:樣本凝固不全。在實驗中有的時候心急為了爭取時間快速檢測,ELISA試劑盒在血液還未開始凝固的時候就強行離心分離血清,導(dǎo)致血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

5、樣本溶血:溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。

    上海極威生物科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)各類ELISA試劑盒,公司涵蓋的產(chǎn)品有:ELISA試劑盒、抗體、血清、培養(yǎng)基、細胞株、生物試劑、化學試劑、各類進口試劑及耗材等,品種齊全、質(zhì)量保障,*,歡迎各位老師!

 


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