SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50556.2 v.A
組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑是一種旨在通過偶氮生色底物，與還原后的一價銅反應(yīng)產(chǎn)生藍色螯合復(fù)合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中總銅濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體組織裂解懸液樣品中總銅的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，檢測敏感。
技術(shù)背景
銅為人體營養(yǎng)中的必需的微量元素。作為輔因子，含銅酶蛋白在鐵和兒茶酚胺（catecholamine）代謝、游離自由基清除、血紅蛋白、彈力纖維和膠原蛋白合成等活動中起著重要作用，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化還原狀態(tài)銅在肝臟和血漿中以銅藍蛋白（caeruloplasmin）形式存在，具有鐵氧化酶抗氧化活性。銅含量過低，會導(dǎo)致智力遲鈍、色素脫失、貧血、張力減退、骨壞血病變化。一旦缺失，將導(dǎo)致心臟病變、骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎、Menkes綜合征、威爾森氏癥等。由此，銅含量檢測成為威爾森氏癥、小細胞低色素性（microcytichypochromic anemia）貧血、骨病等的診斷指標(biāo)。銅的檢測包括化學(xué)法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技術(shù)，但容易受到其它金屬元素的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。4-(3,5-溴
基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺（4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline；Di-Br-PAESA）比色法是一種穩(wěn)定、簡便、準確的銅檢測技術(shù)。在弱酸性條件下，銅從復(fù)合物中解離出來；抗壞血酸（還原型）將解離出來的二價銅離子還原成一價銅離子，一價銅離子與顯色劑DiBr-PAESA生成藍色絡(luò)合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化（波長580nm），來定量測定細胞銅的總濃度。
其反應(yīng)系統(tǒng)為：
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） XX 毫升
裂解液（Reagent B） XX 毫升
去干擾液（Reagent C） XX 毫升
緩沖液（Reagent D） XX 毫升
還原液（Reagent E） XX 瓶
顯色液（Reagent F） XX 毫升
標(biāo)準液（Reagent G） XX 微升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保證3 月
2
用戶自備
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器
DOUNCE 勻漿器：用于組織勻化
微型臺式離心機：用于樣品制備
比色皿：用于反應(yīng)的容器
分光光度儀：用于比色分析
實驗步驟
一、樣品準備
1． 手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定500 毫克組織重量
2． （選擇步驟）放進預(yù)冷的15 毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入XX 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次
4． 移入到一個液氮凍存管
5． 即刻放進液氮罐過夜
6． 次日從液氮罐里取出，即刻（zui快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組=織凍融）
7． 放進一個15 毫升錐形離心管
8． 加入預(yù)冷的XX 微升裂解液（Reagent B）
9． 渦旋震蕩5 秒，充分混勻
10．即刻放進預(yù)冷的DOUNCE 勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40 下）
11．轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5 毫升離心管
12．放進4℃微型臺式離心機離心5 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
13．小心移取500 微升上清液到新的預(yù)冷的1.5 毫升離心管
14．移取10 微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
15．加入XX 微升抗干擾液（Reagent C）
16．渦旋震蕩10 秒
17．放進4℃微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
18．小心移取上清液到新的1.5 毫升離心管
19．即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二、測定準備
1． 準備好待測樣品，置于冰槽里備用
2． 設(shè)定好分光光度儀：波長580nm（570 至590nm 波長），并置零
3． 實驗開始前，移取XX 毫升緩沖液（Reagent D）到1 瓶還原液（Reagent E）中，混勻后，標(biāo)記為反應(yīng)工作液，置于冰槽里備用，避免光照。
三、比色測定
1． 移取XX 毫升上述配制的反應(yīng)工作液到新的1 毫升比色皿
2． 加入XX 微升標(biāo)準液（Reagent E）或待測樣品
3． 上下傾倒數(shù)次，混勻
4． 37℃室溫下孵育5 分鐘，避免光照
5． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得吸光讀數(shù)（OD）
6． 計算樣品銅濃度
XX
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20 次操作，包括標(biāo)準液
2． 本產(chǎn)品線性范圍為3 至400 微克/分升
3． 操作時，須戴手套
4． 避免使用EDTA 等處理樣本
5． 系統(tǒng)操作過程中，標(biāo)準液測定只需1 次
6． 孵育反應(yīng)完成后即刻進行比色測定
7． 比色測定后，比色皿須清洗*
8． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
9． 用戶可以換算獲得：微克/毫克組織或蛋白；微摩爾/毫克組織或蛋白
10．微克/分升換算成微摩爾/升：微克/分升X 0.1573
11．建議用戶建立正常參考值
12．本公司提供系列銅生化檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
使用承諾
秉著“信譽*、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購信息
4
單組份訂購信息
編號名稱規(guī)格
GMS50556.2 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次
GMS50556.2A 清理液（Reagent A） 100 毫升
GMS50556.2B 標(biāo)準液（Reagent B） 50 毫升
GMS50556.2C 去干擾液（Reagent C） 5 毫升
GMS50556.2D 反應(yīng)液（Reagent D） 20 毫升
GMS50556.2E 標(biāo)準液（Reagent E） 200 微升
試劑盒訂購信息
產(chǎn)品編號名稱規(guī)格
GMS50556.1 細胞銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次
GMS50556.2 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次
GMS50556.3 體液銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次
GMS50556.4 食物銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次
GMS50556.5 環(huán)境銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次
GMS50557.1 細胞銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次
GMS50557.2 組織銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次
GMS50557.3 體液銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次
GMS50557.4 食物銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次
GMS50557.5 環(huán)境銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次
