血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。
①抗原量：ELISA實(shí)驗(yàn)中所需的抗原量一般為1-10mg/mL。
②免疫途徑：抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、靜脈注射和淋巴結(jié)注射等。其中以靜脈注射zui為簡(jiǎn)單方便，不需要佐劑乳化，產(chǎn)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早，一般在一周左右，注射后一周即可采血測(cè)試效價(jià)。
注：免疫過(guò)程中應(yīng)注意：a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用：b.采血時(shí)間不宜拖得太長(zhǎng)。因?yàn)槊庖邥r(shí)間越長(zhǎng)，產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗體也越多。
③血清的分離：ELISA試劑盒抗血清的分離，當(dāng)?shù)玫綕M意的效價(jià)時(shí)，即可進(jìn)行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過(guò)一夜。次日用滴管吸取抗血清，用離心法（2000-3000r/min,20min）去掉沉淀。然后測(cè)定效價(jià)、鑒定純度。
注：純度用紫外分光光度計(jì)或Folin氏比色法進(jìn)行測(cè)定。抗血清保存于-25℃低溫處。
④效價(jià)測(cè)定：抗血清的效價(jià)測(cè)定，測(cè)定的方法一般有兩種，即試管沉淀法和免疫雙擴(kuò)散法。對(duì)于免疫酶技術(shù)使用的抗血清，必須具有一定的效價(jià)，試管沉淀法應(yīng)不低于1:2，免疫雙擴(kuò)散法不低于1:2，且要求單價(jià)抗血清。
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