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牛副結核ELISA

閱讀：124發布時間：2016-3-21

（一）材料與試劑
1．副結核分枝桿菌親和層析抗原
2．草分枝桿菌吸收抗原
3．兔抗牛IgG酶標抗體
4．牛副結核病參考陽性血清
5．牛副結核病參考陰性血清
1～5項均由單位供應。
6．器材elisa板, 酶聯免疫吸附檢測儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
7．試劑及溶液配制同第五節豬瘟ELISA。
（二）操作方法
1．抗原包被以抗原稀釋液將副結核親和層析抗原稀釋至50μg/ml,每孔包被0.1ml。部分對照孔以牛血清白蛋白(50μg/ml)包被。
2．血清處理取待檢血清、參考陽性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0.80ml，加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml，混勻，37℃感作1h。取0.10ml，加血清稀釋液0.90ml(注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白，不加犢牛血清)。混勻即可
3．正式試驗按表12－4進行。每個樣品加2孔，以求OD平均值。
表12－4ELISA試驗程序表(單位ml)

（三）結果判定
在對照組成立的前提下, 即參考陽性血清呈棕黃色,參考陰性血清及其它對照孔呈無色或淺黃色, 判定待測結果。
1．目測判定與參考陽性血清孔顏色相當，即呈棕黃色，判為ELISA陽性(＋)。
2．酶標儀判定(490nm)以底物溶液對照孔調零，校正參考陽性血清OD值為1.0(或相應規定值)，測定待檢孔。當OD≥0.50，判ELISA陽性(＋)；0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝(±)；OD<0.40，判ELISA陰性(－)。

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