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齊一生物科技(上海)有限公司

*M酶聯(lián)免疫分析-齊一生物

時間:2018-4-4閱讀:822
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For Research Use Only

僅供研究用

貨號:QY-H10226

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中* M(IgM)水平。用純化的人 IgM 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 M(IgM),再與 HRP 標(biāo)記的免疫球蛋白 M(IgM)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白 M(IgM)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中* M(IgM)濃度。

操作步驟

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl濃度分別為 9μg/ ml6μg/ ml  ,3μg/ ml1.5μg/ ml0.75μg/ ml)。
  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  • 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
  • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
  • 配液:將 3048T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 3048T 的 20 倍)倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘.
  • 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  • 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項:

1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6 底物請避光保存。

7 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

齊一生物科技(上海)有限公司主要經(jīng)營進(jìn)口原裝Elisa試劑盒,自產(chǎn)品牌QIYBO試劑盒,并提供免疫分析相關(guān)試劑和檢測試劑盒。種類齊全,價格實惠,凡購買我公司產(chǎn)品的新老客戶,即可享免費代測實驗服務(wù),可檢測多種屬樣本。全程提供。如需其他Elisa試劑盒說明書及報價,可我公司! 

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