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鈣濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/48樣
測(cè)定意義:
血鈣幾乎全部存在于血漿中,所以血鈣主要指血漿鈣。血漿鈣有離子鈣和結(jié)合鈣兩種形式,其中只有離子鈣直接起生理作用,它與結(jié)合鈣處于動(dòng)態(tài)平衡,并受血液pH的影響。血鈣水平與多種重要的生理功能相關(guān),過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響正常生理功能。本試劑盒用于檢測(cè)血液中游離鈣濃度。
測(cè)定原理:
在強(qiáng)堿溶液中游離鈣與GBHA反應(yīng)生成紅色鈣-GBHA復(fù)合物,在520 nm有吸收峰;通過(guò)測(cè)定520 nm吸光度,計(jì)算游離鈣濃度。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、無(wú)水甲醇、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶(空瓶,試劑自備)。取30 mL試劑瓶。依次加入27 mL無(wú)水甲醇和3 mL丙酮,蓋緊混勻即可。
標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1瓶,3μmol/mL,4℃保存。
血鈣濃度測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到520 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入蒸餾水50μL,試劑一200 μL,混勻;再加入試劑二200μL,混勻;zui后加入試劑三400μL,混勻;靜置5min后于520 nm測(cè)定吸光度A空白管。做一個(gè)空白管即可。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取1mL玻璃比色皿,依次加入標(biāo)準(zhǔn)液50μL,試劑一200 μL,混勻;再加入試劑二200μL,混勻;zui后加入試劑三400μL,混勻;靜置5min后于520 nm測(cè)定吸光度A標(biāo)準(zhǔn)管。做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管即可。
4. 測(cè)定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入血液樣品50μL,試劑一200 μL,混勻;再加入試劑二200μL,混勻;zui后加入試劑三400μL,混勻;靜置5min后于520 nm測(cè)定吸光度A測(cè)定管。記為A測(cè)定管。
注意:加試劑三后,應(yīng)該在30 min內(nèi)完成該管的測(cè)定。
血鈣濃度計(jì)算:
血鈣含量(μ mol /dL血液)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V樣品總=300×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液:3μmol/mL; V樣總:樣品總體積,1 dL=100 mL。
注意事項(xiàng):宜早晨空腹采血,并且采血后應(yīng)該盡快完成測(cè)定。
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