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齊一生物科技(上海)有限公司

直鏈淀粉含量試劑盒說明書-齊一生物

時間:2017-9-6閱讀:1448
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僅供研究用
貨號:QYS-234045
直鏈淀粉含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

直鏈淀粉含量試劑盒說明書正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測定對于評價食品營養價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。
測定原理:

利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡合物在 620nm 下有吸收峰。
需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 50mL×1 瓶;4℃保存;
試劑二:乙醚 50mL×1 瓶;(自備)
試劑三:液體 50mL×1 瓶;4℃保存;
試劑四:液體 4mL×1 瓶; 4℃保存;
試劑五:液體 1mL×1 瓶;4℃保存;
直鏈淀粉含量試劑盒說明書淀粉提取:

稱取 0.01~0.02g 烘干樣本(建議稱取約 0.01g)于研缽中研碎,加入 1mL 試劑一,充分勻漿后轉移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑二(乙醚)振蕩 5min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑三充分溶解,90℃水浴 10min,冷卻后待測。
測定步驟:

1、 分光光度計 30min 以上,調節波長至 620nm,蒸餾水調零。

測定管:在 EP 管中依次加入 100uL 樣本,70uL 試劑四,600uL 蒸餾水,10uL 試劑五,220uL蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 測定。
空白管:在 EP 管中依次加入 100uL 試劑三, 70uL 試劑四,600uL 蒸餾水,10uL 試劑五, 220uL 蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 空白。
直鏈淀粉含量計算:

標準條件下測定的回歸方程為 y=1.755x+0.0062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算
直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A 測定

-A 空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A 測

定-A 空白-0.0062) ÷W

V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g

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