乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測(cè)定試劑盒說明書 
                                                                                         分光光度法    50 管/48 樣 
注意?正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期?異大的樣本做預(yù)測(cè)定? 
測(cè)定意義? 
AchE 屬于*水解酶?廣泛存在于各種動(dòng)物組?和血清中?AchE催化乙?*?Ach?
水解?在神?傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用? 
測(cè)定原理? 
AchE 催化Ach水解生成*?*與二硫?qū)ο趸郊姿?DTNB?作用生成 5-?基-硝基苯
甲酸?TNB??TNB 在 412nm 處有吸收峰?通過測(cè)定 412  nm 吸光度增?速率??算 AchE
活性? 
乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測(cè)定試劑盒說明書 自備儀器和用品? 
可見分光光度???溫離心機(jī)?水浴鍋?可調(diào)式移液槍?1mL 玻璃比色皿和蒸餾水? 
試劑組成和配制? 
提取液?液體×1 瓶?4℃保存? 
試劑一?液體×1 瓶?4℃保存? 
試劑二?粉劑×1 瓶?4℃保存?臨用前?入 2.6mL試劑一?充分震蕩溶解? 
試劑й?粉劑×1 瓶?4℃保存?臨用前?入 2.6mL試劑一?充分震蕩溶解? 
粗酶液提取? 
1.  組??按照組?質(zhì)??g??提取液體?(mL)為 1?5~10的比例?建議?取約 0.1g 組??
?入 1mL提取液?進(jìn)行冰浴勻漿?8000g 4℃離心 10min?取к清液待測(cè)? 
2.  ?菌?真菌?按照?胞數(shù)??104
個(gè)??試劑一體??mL?為 500~1000?1 的比例?建
議 500萬?胞?入 1mL提取液??冰浴超聲波破碎?胞??率 300w?超聲3 。?間隔 7
。?總時(shí)間 3min??然后 8000g?4℃?離心 10min?取к清置于冰к待測(cè)? 
3.  血清等液體?直接測(cè)定? 
乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測(cè)定試劑盒說明書 測(cè)定操作? 
1.  分光光度?預(yù)熱 30 min?調(diào)節(jié)波長到 412 nm?蒸餾水調(diào)零? 
2.  試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30min? 
3.  空白管?取 1mL玻璃比色皿?依次?入 100µL 蒸餾水?800 µL試劑一?50µL試劑二和
50 µL試劑й?迅速混勻?于 412nm處測(cè)定3min 內(nèi)吸光值變化?第 10s吸光值記為 A1?第
190s吸光值記為A2?△A空白管=A2ˉA1 
4.  測(cè)定管?取 1mL玻璃比色皿?依次?入 100µL к清液?800 µL試劑一?50µL試劑二和
50  µL試劑й??迅速混勻?于 412nm處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化?第 10s吸光值記為A3?
第 190s吸光值記為A4?△A測(cè)定管=A4-A3 
注意?空白管只需測(cè)定一次? 
AchE 活性?算公式? 
1.  組?AchE 活性 
?1?按照蛋白濃度?算 
活性單?定義??毫克蛋白?分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶?為 1個(gè)酶活單?? 
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A 測(cè)定管-△A空白管)÷ε÷d×V 反總×109
]÷ ?Cpr ×V樣? ÷T 
= 245×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷Cpr 
?2?按照樣本質(zhì)??算 
活性單?定義??克組??分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶?為 1個(gè)酶活單?? AchE酶活(nmol/min/g鮮重)= [(△A測(cè)定管-△A空白)÷ε÷d×V反總×109
]÷ ?W ×V樣÷V樣總?
÷T 
= 245×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷W 
2.  ?菌??胞AchE 活性 
活性單?定義?? 104
個(gè)?胞?分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶?為 1 個(gè)酶活單?? 
AchE酶活(nmol/min/104
 cell)= [(△A測(cè)定管-△A空白)÷ε÷d×V反總×109
]÷ ??胞數(shù)?×V樣÷V
樣總?÷T 
= 245×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷?胞數(shù)? 
3.  血清AchE 活性 
活性單?定義??毫升血清?分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 的酶?為 1個(gè)酶活單?? 
AchE 酶活(nmol/min /mL)= [(△A測(cè)定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109
]÷×V樣÷T 
=245×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷Cpr 
ε?TNB摩爾消光系數(shù)?13.6×103
 L/mol/cm?V 反總?反應(yīng)體系總體??L??1 mL=0.001 L?
106
?1mol=1×106
µmol?V 樣總??入提取液體??1mL?Cpr?蛋白濃度?mg/mL??W?
乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測(cè)定試劑盒說明書 樣本質(zhì)??g?V樣??入к清液體??mL??0.1 mL?T?反應(yīng)時(shí)間?min??3 min?