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產品名稱:人甲狀腺癌細胞(未分化)
英文名稱:KHM-5M
培養(yǎng)基:RPMI-1640*培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS
形態(tài):成纖維細胞樣,多角形,邊緣不規(guī)則,單層貼壁生長,背景干凈,不產色素,無空泡
生長條件:培養(yǎng)溫度37℃;氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣
生長特性:貼壁生長
儲存方式:液氮
傳代方法:
復蘇步驟:①凍存管從液氮或-80℃中取出放入PE手套中,迅速沒入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以1分鐘內全部溶解為宜;②在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9ml *培養(yǎng)基的離心管內,1000-1200rpm/min離心5分鐘,棄去上清液,用1-2mL*培養(yǎng)基重懸細胞。③然后將細胞懸液加入到含有5-6mL*培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細胞傳代:①將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰霉(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰霉輕輕吹打細胞層某處,肉眼可見細胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰霉,加入5-6毫升*培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。③將細胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當?shù)?培養(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。④注意培養(yǎng)基pH值變化和細胞密度,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%-90%時,重復傳代操作或者凍存。
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