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當(dāng)前位置:南京信帆生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>免疫組化實(shí)驗(yàn)應(yīng)該如何分析
□面密度,累積光密度值(IOD)/待測區(qū)域組織面積:累積光密度值是所有陽性信號光密度的積分,除以待測區(qū)域組織面積可反映陽性多少和深淺,成正比。優(yōu)點(diǎn)是既考慮了陽性的面積以及陽性的深淺,且不受待測組織大小的影響。
□陽性率,陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù):分析陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的占比。反映陽性細(xì)胞數(shù)量比率高低,成正比。優(yōu)點(diǎn)適用于細(xì)胞類型較單一的情況。比如腫瘤組織中KI67指標(biāo)腫瘤細(xì)胞增值比率,脾臟組織內(nèi)CD3指標(biāo)T細(xì)胞比率等。
□陽性細(xì)胞密度,陽性細(xì)胞數(shù)/待測區(qū)域組織面積:分析陽性細(xì)胞數(shù)占待測區(qū)域組織面積之比。反映單位面積內(nèi)陽性細(xì)胞個數(shù),成正比。優(yōu)點(diǎn)不受多種細(xì)胞類型數(shù)量影響。常用在浸潤型的炎性細(xì)胞中,比如肝組織中某類炎性細(xì)胞占比,代表性指標(biāo)MPO、CD68等。
□陽性強(qiáng)度,各陽性點(diǎn)顏色深淺的平均值:反應(yīng)整張片子或者某個區(qū)域陽性的平均深淺度。明場為平均光密度(average optical density),暗場為平均強(qiáng)度(average intensity),數(shù)值越大陽性程度越強(qiáng)。適用性廣,由于沒有考慮陽性面積,在極端情況下會出現(xiàn),陽性極少且顏色深時陽性強(qiáng)度值高,陽性點(diǎn)多且顏色淺時陽性強(qiáng)度值低。可以結(jié)合陽性面積一起評價。
□陽性面積比,陽性面積/待測區(qū)域組織面積:不考慮陽性深淺的變化,單純的比較陽性面積占比。
□MVD,微血管數(shù)量/視野:單位面積內(nèi)微血管數(shù)量,對于微血管的識別不需具備完整的管腔和紅細(xì)胞,只要有明顯的血管內(nèi)皮細(xì)胞染色、并且能與相鄰的血管、實(shí)質(zhì)細(xì)胞以及間質(zhì)成分相分隔的,就可視為一個獨(dú)立的血管,分辨不清、管腔直徑>8個紅細(xì)胞直徑的血管以及具有較厚肌層的血管不納入計數(shù)內(nèi)。常用指標(biāo)CD31、CD34。此項(xiàng)只能分析高倍視野的圖片。
□IRS評分:對免疫組化切片中的染色程度(0-3分)以及陽性率(0-4分)分別評分后相乘得到綜合評分(0-12分)。具體如下,染色強(qiáng)度以目的細(xì)胞呈現(xiàn)染色特性計分:無著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;以細(xì)胞陽性比率進(jìn)行計分:0~5%為0分,6%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。綜合評分可劃分陽性高低后進(jìn)行統(tǒng)計,常用于癌和癌旁的芯片生存分析中。
□H-Score:即 Histochemistry score (組織化學(xué)評分)的縮寫,是處理免疫組化的一種組織學(xué)評分方法,將每張切片內(nèi)陽性數(shù)量及其染色強(qiáng)度轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的數(shù)值,達(dá)到對組織染色半定量的目的。H-Score(H-SCORE=∑(pi×i)=(percentage of weak intensity×1)+(percentage of moderate intensity×2)+(percentage of strong intensity×3),式中pi表示陽性信號像素面積/細(xì)胞數(shù)量占比;i代表著色強(qiáng)度)。H-score為0-300之間的數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)越大說明綜合陽性強(qiáng)度越強(qiáng)。
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