當前位置:上海谷研實業有限公司>>技術文章>>小鼠脾臟DC的分離方法
小鼠脾臟DC是研究zui多的淋巴組織DC,其特征為組成性表達MHC-II類分子和CD11c。該細胞群可進一步分為三群:主要分布于邊緣區的CD4+CD8-CD11b+DC,主要分布于T細胞區的CD4-CD8+CD11b-DC和雙陰性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中,CD8+DC表達CD1d和DEC-205。我們可以根據需要選擇不同的方法將脾臟DC分選出來。
(一)貼壁法
小鼠脾臟DC在體外可黏附于玻璃或塑料表面,但培養18-24h后,其黏附能力喪失,借此可與巨噬細胞分離。該方法無需特殊試劑,不需要進行密度梯度離心,操作簡單、省時。但用此方法獲取的DC數量少,純度低,而且分離所得的DC處于不同的分化階段,無法滿足精細實驗的需要。
(二)磁珠分選法
CD11c表達于所有已知小鼠DC表面,所以將包被了磁珠的CD11c抗體與小鼠淋巴組織或非淋巴組織懸液共孵育并置于磁場后,結合了CD11c抗體的細胞將留在分選柱中,脫離磁場后可分離得到CD11c陽性的DC。該方法簡單易行,若操作得當,細胞純度可以達到95%以上。但需購置相應分選設備及試劑,花費較高。
(三)流式細胞儀分選
DC表面表達多種相對特異性的表面標志,可根據實驗需要,選用某些特定表面標志的單克隆熒光抗體作標記,明確目的細胞群,通過流式細胞儀做自動分選。
該方法可以根據多個標記進行細胞分選,彌補了MACS分選的不足,而且分離得到的DC細胞純度更高。但是采用FCM分選目前存在的主要問題是DC的種類很多,發育的過程和表面特征標志目前尚未*清楚。因此,在做DC分離時,必須視標本來源及目的細胞選擇合適的單克隆抗體精選標記。另外,進行流式分選必須購置具有分選功能的流式細胞儀,價格昂貴,對操作人員的技術也有較高要求。
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