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上海谷研實業有限公司

蛋白質的濃度測定

時間:2015-6-29閱讀:360
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將待測蛋白配成合適濃度

    另取3支清潔試管,編號8、9、10,用微量注射器按表6-2操作,將待測蛋白配成系列濃度。


待測蛋白的稀釋

管號待測蛋白質(mL)緩沖液(mL)總體積(mL)稀釋倍數
820801005
940601002.5
1060401001.67


加入G250試劑

    各試管充分混勻后,用取樣器分別加入5.0mL考馬斯亮蘭G250試劑,每加完一管,立即混合(注意不要太劇烈,以免產生大量氣泡而難于消除)。


比色

    各管室溫靜置2~5min后,在分光光度計上測定595nm處的光吸收值A 595 ,空白對照為第1號試管,標準和待測蛋白樣同時比色。


    注意:不可使用石英比色皿(因不易洗去染色),只能使用玻璃比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇潤洗,洗去顏色。

                           

制作標準曲線

    以標準蛋白質濃度(mg/mL)為橫座標、吸光度值A 595 為縱座標作圖,即得到一條標準曲線。


根據標準曲線計算待測蛋白濃度

    在標準曲線上,根據測出的待測樣品的A 595 值,查出試管中蛋白質濃度,再按照計算公式:

待測蛋白質的濃度(mg/mL)=查出的濃度×稀釋倍數

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