當(dāng)在含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的納米細(xì)菌被轉(zhuǎn)移至不含血清的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)時(shí) (DMEM或RPMI-1640), 在1 a之內(nèi)就可以觀察到納米細(xì)菌出現(xiàn)貼壁現(xiàn)象, 在1 wk之內(nèi), 就可以在納米細(xì)菌的周圍形成幾微米厚的生物被膜 (biofilm), 并且緊緊貼附于培養(yǎng)瓶底部, 而納米細(xì)菌棲息其中(這與在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的納米細(xì)菌的形態(tài)明顯不同), 此時(shí)其大小接近于一個(gè)酵母細(xì)胞, 2-3 wk以后, 由于生物被膜的增厚, 其直徑已近似于一個(gè)紅細(xì)胞的大小. 用EDX法對這種生物被膜的化學(xué)組成進(jìn)行分析, 顯示其鈣磷的峰值與羥基磷灰石極其相似, 電子顯微鏡觀察以及傅立葉轉(zhuǎn)換紅外頻譜(fourier transform IR spectroscopy, FTIR)分析顯示其主要成分為碳酸羥基磷灰石(carbonate hydroxyapatite), 而且,不論在有無血清作為添加劑的情況下, 都可以見到這種被羥基磷灰石包繞的納米細(xì)菌, 這種情況甚至可以在處于分裂期的納米細(xì)菌中見到. 納米細(xì)菌并不產(chǎn)生*和堿性磷酸酶, 并且即便經(jīng)過長達(dá)數(shù)周的培養(yǎng), 其培養(yǎng)基的pH值也不會出現(xiàn)明顯的變化, 一直穩(wěn)定在7.4左右, 這表明在納米細(xì)菌細(xì)胞膜表面所生成的羥基磷灰石結(jié)晶是源自于生物大分子的, 即生物礦化現(xiàn)象, 而并非是由于pH值改變所導(dǎo)致的簡單的物理結(jié)晶現(xiàn)象.納米細(xì)菌利用培養(yǎng)體系中的鈣、磷合成羥基磷灰石作為其生物被膜的主要成分, 這種生物礦化過程受到生長環(huán)境中某些因素的調(diào)控, 從而使其呈現(xiàn)不同的外觀, 如羥基磷灰石形、細(xì)菌被膜形、沙粒形、結(jié)石形和類似腫瘤的外形. （這也許就是國內(nèi)的一些研究者們認(rèn)為其是一些磷酸鹽類的無機(jī)物的部分原因吧！）。在含有新鮮血清的培養(yǎng)基中納米細(xì)菌的生物礦化現(xiàn)象程度較輕微, 這是由于血清中含有強(qiáng)效羥基磷灰石合成抑制因子, 骨鈣素 (osteocalcin) 和胎球蛋白(fetuin), 由于這些抑制蛋白的存在, 所以在有血清存在的情況下, 納米細(xì)菌的生物礦化作用受到明顯抑制. 當(dāng)血清濃度降低時(shí), 納米細(xì)菌的生物礦化現(xiàn)象增強(qiáng), 在不含血清的培養(yǎng)體系中, 生物礦化現(xiàn)象劇烈而迅速. 盡管改良的Loeffler固體培養(yǎng)基中含有750 mL/L血清成分, 但血清蛋白成分在滅菌過程中受到破壞, 所以在此培養(yǎng)基中的納米細(xì)菌的礦化作用并不受抑制, 在此培養(yǎng)基中生長的納米細(xì)菌其菌落直徑可達(dá)1-5 mm. 另外, 當(dāng)有乙二胺四乙酸(EDTA)存在時(shí), 納米細(xì)菌的生物現(xiàn)象會受到明顯的抑制.由于礦化生物被膜的保護(hù)作用以及極其緩慢的新陳代謝率, 使納米細(xì)菌能夠耐受各種不利的物理?xiàng)l件和化學(xué)損傷因素以及多種抗生素的打擊. 2.4納米細(xì)菌的檢測方法 由于納米細(xì)菌在標(biāo)準(zhǔn)微生物培養(yǎng)基中無法生長, 并且即便是在zui適宜其生長的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中, 納米細(xì)菌的生長也極為緩慢, 其新陳代謝率僅為普通細(xì)菌的萬分之一, 這使得許多基于檢測細(xì)菌新陳代謝的微生物學(xué)方法無法檢測納米細(xì)菌的存在. 由于納米細(xì)菌難以用傳統(tǒng)的火焰法和乙醇法固定, 并且大多數(shù)染料無法穿透其細(xì)胞壁, 而且不能用普通顯微鏡對其進(jìn)行觀察, 因此常規(guī)的細(xì)菌學(xué)染色法并不能檢測到納米細(xì)菌的存在. 通過Kajander et al 的研究, 發(fā)現(xiàn)70℃干烤10 min, 可以將其有效固定; 另外, 用茜素紅S、剛果紅以及*染料可以使納米細(xì)菌著色; 而培養(yǎng)狀態(tài)下的納米細(xì)菌可以在放大400倍的相差顯微鏡下清晰地觀察其生長情況; 用DNA熒光染料 (Dapi或Hoechst) 按普通細(xì)菌DNA染色的條件對納米細(xì)菌DNA進(jìn)行染色均不成功, 而當(dāng)按照線粒體DNA以及病毒DNA染色條件, 對納米細(xì)菌DNA進(jìn)行染色時(shí), 熒光顯微鏡下可以觀察到特征性的熒光; 用納米細(xì)菌特異性抗體進(jìn)行熒光染色也可以清晰地顯示納米細(xì)菌的存在; 利用電子顯微鏡對經(jīng)過負(fù)染的納米細(xì)菌進(jìn)行觀察, 可以清晰的顯示80-350 nm大小、單獨(dú)或聚集成簇的納米細(xì)菌以及其表面的生物被膜(biofilm)結(jié)構(gòu); 而用透射電鏡對納米細(xì)菌的超薄切片進(jìn)行觀察, 可以清晰的顯示其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 可以發(fā)現(xiàn)如下的特點(diǎn)：

   （1） 與細(xì)胞共生，細(xì)胞長的好或密度大的話，小黑點(diǎn)就少，反之則 多；

   （2） 對抗生素?zé)o效；

   （3） 可能通過培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染；

   （4） 單用培養(yǎng)液及血清培養(yǎng)沒發(fā)現(xiàn)問題。

   （5） 換掖沖洗后也無效。