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選擇培養基沒有一定的標準,有幾點建議可供參考: (1)建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞的培養基。可以查閱參考文獻,或在購買細胞株時咨詢。 (2)其它實驗室慣用的培養基不妨一試,許多培養基可以適合多種細胞。 (3)根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小
選擇培養基沒有一定的標準,有幾點建議可供參考:
(1)建立某種細胞株所用的淋巴細胞培養基應該是培養這種細胞的培養基。可以查閱參考文獻,或在購買細胞株時咨詢。
(2)其它實驗室慣用的培養基不妨一試,許多培養基可以適合多種細胞。
(3)根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選 RPMI1640 。
(4)用多種培養基培養目的細胞,觀察其生長狀態,可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷,根據實驗結果選擇培養基,這是zui客觀的方法,但比較繁瑣。
很多細胞生長要求在培養液中添加*。*在溶液中很不穩定,應置于-20?C冰凍保存,用前加入培養基中。加有*的液體培養基4?C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的*。另一種選擇是使用L-*的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如啟維益成公司代理的GenDepot的產品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-*。Glutaplex與L-*相比更加穩定,降解比較慢,提高細胞的存活和生長,極大降低對細胞有毒性的氨的積累。
3.培養基中是否應加酚紅:
酚紅在培養基中被用來作為pH值的指示劑,中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,特別是雌激素。為避免固醇類反應,培養細胞尤其是哺乳類細胞時,應使用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時不使用加酚紅的培養基。
4.使用血清應注意的問題:
1)血清*次使用前,是否應在56oC,30分鐘加熱血清以滅活補體系統?
激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞生長只有微小的促進或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率降低。而經過熱處理的血清沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。而把血清放在37℃環境中又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量。
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