1 資料和方法

1.1 觀察對象

    隨機選取初診為喉癌的患者36例，組織病理學證實均為鱗狀上皮癌，其中高分化2例，低分化29例;男30例，女6例，平均年齡(60.0±8.1)歲。取活檢前全部病例均未接受任何治療。按照抗癌協會TNM分期的方案，36例中Ⅰ期6例，Ⅱ期15例，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。

1.2 免疫組化染色

    取喉部腫瘤活檢標本，分為2份，其中1份送組織病理學檢查證實喉癌的診斷，另1份作免疫組織化學檢測(下稱免疫組化)。采用腎癌組織為陽性對照標本。將組織作厚度為5 μm的切片，經脫蠟等常規處理后，其中1張切片做HE染色，另1張做免疫組化用。簡單的免疫組化的操作步驟如下：對切片加入1%H2O2甲醇溶液，抑制內源性過氧化物酶;在磷酸緩沖液( PBS)中洗5 min，共3次;滴加3%的非免疫馬血清，在37℃保溫20 min，阻斷非特異性免疫結合反應;在PBS中洗滌，方法同前;滴加抗PCNA或survivin單克隆抗體(Santa Cruz產品)，稀釋度為1∶50 溶液，37℃溫育60 min后放在4℃冰箱中過夜;次日按前法用PBS 洗滌，再滴加*化羊抗鼠IgG單克隆抗體(北京中山生物技術有限公司產品，1∶50 稀釋)，在37℃中保溫40 min;按前法PBS洗滌后滴加ABC復合物(北京中山生物技術有限公司產品，1∶50稀釋)，37℃保溫40 min;按前法用PBS洗滌，滴加新鮮配制的酶底物二氨基聯苯二胺鹽酸鹽顯色，zui后用蘇木素輕度復染。陽性對照標本，按上述步驟染色。陰性對照標本除以PBS代替*抗體外，其它步驟與被測標本相同。

    結果判斷：光鏡下觀察到細胞核或胞漿內出現紅棕色顆粒為陽性(PCNA在胞核，survivin在胞漿和胞核)，不染色為陰性。在切片四角和*各選一高倍視野，各計數200個細胞。陽性細胞數≥10%者界定為陽性病例，陽性細胞數<10%者為界定陰性病例。

1.3 化學治療

    *20～25 mg/m2，靜脈滴注，每天1次，共3 d;甲酰四氫*鈣100 mg，靜脈滴注，每天1次，共5 d;5氟*500～750 mg/m2，靜脈滴注，每天1次，共5 d;*8 mg溶于20 mL生理鹽水內，靜脈推注，每天1次，共4 d。每月循環1次，共3個月。

    患者的*療效按RECIST[2]評價標準。*緩解(CR)：所有目標病灶消失，無新病灶出現，腫瘤標記下降至正常，并維持4周;部分緩解(PR)：所有(一個或多個)基線目標病灶zui長徑總和減少≥30%，并維持4周;疾病穩定(SD)：所有基線目標病灶zui長徑總和縮小但未達PR，或增大但未達PD;疾病進展(PD)：較已記錄到得zui小目標zui長徑總和增大≥20%，或出現一個或多個新病灶。本研究將CR及PR視為對*敏感，SD及PD視為對*不敏感。

1.4 統計學處理

采用確切概率法。

2 結果

2.1 *效果

    36例喉癌，經*、5氟*和*聯合*方案治療后，對*敏感者有24例，占66.6%;對*不敏感者有12例，占33.3%。抗體

2.2 PCNA在喉癌中的表達及其與喉癌組織*敏感性的關系

    PCNA陽性表達信號位于細胞核，36例喉癌中，陽性表達者20例，占55.6%;陰性表達者16例，占44.4%。PCNA陽性組的*敏感性(90.0%)明顯高于PCNA陰性組(37.5%)(P<0.01)，見表1。

2.3 survivin在喉癌中的表達及其與喉癌組織*敏感性的關系

survivin陽性表達信號位于細胞漿和細胞核，36例喉癌中，陽性表達者23例，占63.8%;陰性表達者13例，占36.2%。survivin陽性組的*敏感性(90.0%)與survivin陰性組的敏感性差異無統計學意義(65.2% vs 69.2%, P>0.05)，見表2。表1 喉癌組織PCNA陽性組與陰性組對*敏感性的比較表2 喉癌組織survivin陽性組與陰性組對*敏感性的比較 例(%)兩組比較：P=1.000(確切概率法)。

3 討論

    *在惡性腫瘤的治療中具有重要作用。*效果取決于腫瘤細胞對抗癌藥物的敏感性。導致*失敗的原因很復雜，存在著多種機制，例如腫瘤多藥耐藥性(MDR)是腫瘤細胞對抗癌藥物表現出耐藥性的作用機制之一，某些影響細胞的生長繁殖、凋亡的基因分子也影響腫瘤細胞對抗癌藥物的敏感性。

    PCNA是一種分子質量為36 000非組蛋白細胞核多肽，是DNA復制時聚合酶6的輔助成分，在細胞增殖中起著重要作用，其表達在G1期開始增高，s期達到高峰，G2期和M期明顯下降。腫瘤細胞中PCNA含量反映了腫瘤增生能力的高低。有研究發現，晚期卵巢癌、腺癌、軟組織肉瘤、骨腫瘤及宮頸癌等中的高PCNA表達病例的*效果較好，因而提出腫瘤細胞的PCNA表達水平可以預測某些腫瘤對*的敏感性[3]。survivin作為凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中結構*的新成員，其分子量zui小，但具有強大抗凋亡作用。survivin特異性表達于胚胎和胎兒組織及絕大多數腫瘤組織，但在終末分化的成人組織(除胸腺、生殖腺外)中不表達。多方面的研究提示，它與腫瘤的發生密切相關，且其表達往往與腫瘤的惡性程度、預后不良呈正向關系。反義survivin核酸降低survivin表達后，增強胃癌細胞對*藥物*的敏感性[4]。PCNA和survivin的異常表達在喉癌的發生發展過程中起著重要作用，并且與喉癌的組織分化程度、臨床分型、淋巴結轉移密切相關，可作為喉癌的病理診斷及判斷預后的參考指標[5]。

    PCNA和survivin的異常表達可作為喉癌的病理診斷及判斷預后的參考指標，那么，能否作為*敏感性的指標呢?在本實驗中，我們發現PCNA表達陽性的喉癌組織對*敏感性明顯高于PCNA陰性組(90.0% vs 37.5%, P<0.01), 說明PCNA在喉癌中表達可以增強腫瘤對*的敏感性。而survivin陽性病例與survivin陰性病例相比較, 喉癌對*的敏感性差異無統計學意義(P>0.05)，說明survivin的表達對喉癌*敏感性的影響不大。我們的研究結果提示, PCNA高表達可作為預測喉癌對*敏感的指標之一，而survivin的異常表達似不宜作為預測喉癌對*敏感的指標。但由于本實驗所研究的病例數尚較少，需要增加病例做進一步研究。 抗體