(1)無(wú)毒和無(wú)菌

    無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要環(huán)境條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，偶爾有細(xì)菌或有害物質(zhì)入侵，因體內(nèi)有強(qiáng)大的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，可將其解毒或清除，而不易受損害。但在離體的環(huán)境中，失去了防御系統(tǒng)，一旦有害物質(zhì)入侵或細(xì)菌污染，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡，前功盡棄。如培養(yǎng)瓶皿、支持物、培養(yǎng)基、瓶蓋、瓶塞上若有細(xì)胞毒性，在培養(yǎng)過(guò)程中可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此，在選用這些器皿、材料時(shí)要注意，若這些物品消毒不*，帶菌或操作過(guò)程不小心使細(xì)胞污染，也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。若出現(xiàn)交叉污染，可使實(shí)驗(yàn)室原來(lái)的細(xì)胞系失去原有特性，應(yīng)引起足夠的重視。

(2)輻射線和超聲波

1．可見(jiàn)光可見(jiàn)光的波長(zhǎng)是390～780nm?？梢?jiàn)光的各種有色光能引起細(xì)胞蛻變，延長(zhǎng)核分裂的問(wèn)期，還可顯著降低細(xì)胞的附壁能力。因此，體外培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)避免日光直接照射，在黑暗中進(jìn)行培養(yǎng)或短期存放。

2．紫外線弱紫外線下耐受能力強(qiáng)的細(xì)胞變化不大，但對(duì)敏感的細(xì)胞有損害。紫外線強(qiáng)時(shí)，新分離的細(xì)胞顯示：不能進(jìn)行*的有絲分裂；在有絲分裂時(shí)增加了脫水收縮；在有絲分裂時(shí)細(xì)胞質(zhì)的起泡減少。Elrlich腹水癌細(xì)胞經(jīng)紫外線照射后，用飛點(diǎn)紫外線顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)被照射表面形成水泡，隨后細(xì)胞膨脹，損害也漸變嚴(yán)重。

3．放射線X射線對(duì)細(xì)胞有明顯損傷。β射線可影響細(xì)胞核的分裂。γ射線使核分裂數(shù)減少并出現(xiàn)不正常的核分裂，可使細(xì)胞死亡。

4．超聲波和振動(dòng)在超聲波振動(dòng)下，細(xì)胞很快會(huì)破裂，開(kāi)始是胞質(zhì)發(fā)生紊亂的流動(dòng)，原生質(zhì)膠體結(jié)核也有明顯變化，若停止超聲波振動(dòng)可回復(fù)。細(xì)胞致死的原因是由于產(chǎn)生空化作用所致。當(dāng)超聲波在2．5w／cm2時(shí)，細(xì)胞受損，染色體發(fā)生畸變，首先發(fā)生畸變的是核染色體。

(3)細(xì)胞接種濃度(密度)

    在體外培養(yǎng)細(xì)胞中，細(xì)胞接種數(shù)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)有影響，適宜的接種密度，可以促使細(xì)胞增殖，接種密度太低或太高都不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。如果培養(yǎng)液與細(xì)胞的容積比例大于2000：1，生長(zhǎng)物質(zhì)彌散到細(xì)胞外的比例將是細(xì)胞內(nèi)達(dá)到低于zui小限度的濃度，此時(shí)細(xì)胞不能再增殖，培養(yǎng)液中的pH變堿，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞變圓不能貼壁，甚至引起細(xì)胞死亡等。如果接種密度太高，每個(gè)細(xì)胞周?chē)囵B(yǎng)液的容積降至O．007mm3以下，由于彌散率的降低，細(xì)胞內(nèi)生物質(zhì)的濃度增加，容易使排除物或其他代謝產(chǎn)物達(dá)到飽和，能量來(lái)源也很快耗盡．因此也會(huì)妨礙細(xì)胞的增殖。

    如何選擇適宜的接種濃度要根據(jù)細(xì)胞的代謝和生長(zhǎng)繁殖速度以及工作的需要而確定。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞代謝旺盛、生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞，接種濃度宦偏低；而正常組織細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，代謝不夠旺盛，接種濃度可偏高；如果是為了保種或不需急用，接種濃度可偏低些；有時(shí)為了便于觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，接種濃度也可適當(dāng)降低。

(4)容器轉(zhuǎn)動(dòng)速度和懸浮攪動(dòng)速度

    有時(shí)為了研究的需要而將培養(yǎng)細(xì)胞在容器中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)或攪動(dòng)，如貼壁細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)管中培養(yǎng)，使轉(zhuǎn)鼓的轉(zhuǎn)速提高，細(xì)胞增殖率隨之提高。其原因可能是轉(zhuǎn)動(dòng)使足夠的營(yíng)養(yǎng)流動(dòng)和較充分的氧化作用之故。

    當(dāng)懸浮攪拌培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，攪拌速度既不能太快，也不能太慢。如太慢，細(xì)胞易結(jié)團(tuán)、下沉和貼壁，不利于細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下增殖。如果太快．容易起泡沫，細(xì)胞易窒息致死，同時(shí)，強(qiáng)烈地?cái)噭?dòng)易使細(xì)胞因機(jī)械損傷而破裂。所以選擇適宜的攪拌速度很重要。如BHK2l的攪拌速度適宜為460～330r／min；淋巴細(xì)胞(Raji)株，在200r／min和400r／min時(shí)細(xì)胞致不增不減，或稍有下降，而攪拌速度增加到600r／min時(shí)出現(xiàn)生長(zhǎng)；類(lèi)淋巴細(xì)胞(Namal—va)生長(zhǎng)速度快，在80～100r／min時(shí)既不結(jié)團(tuán)，又不需加抗泡沫劑，且細(xì)胞生長(zhǎng)仍然很快。各種細(xì)胞的適宜攪拌速度不一致，通常與細(xì)胞的特性和質(zhì)量有關(guān)，予以注意。