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利用兩種不同直徑的膠體金顆粒標記兩種第二抗體，在電鏡下進行兩種不同抗原的亞細胞定位。基本原則：首先需購買擬研究的兩種抗原的特異性抗體 ，以及不同直徑金顆粒標記的相應第二抗體，然后在同一張載網上分別或同時顯示組織細胞內兩種抗原所在部位。染色方法主要為包埋后染色，操作步驟與顯示單一抗原的包埋后染色程序基本相同，在*種抗體染色后，再重復上述染色過程，顯示另外一種抗原成分。也可分別將兩種不同種屬來源的特異性抗體(*抗體)和不同直徑膠體金顆粒標記的相應第二抗體 混合，直接孵育，這樣可節省重復染色過程所需要的時間，并可減少重復染色帶來的污染。
理想的染色結果應背景清潔，金顆粒集中在抗原抗體反應部位。欲獲得*染色，實驗中需注意：
①用高特異性和高親和力抗體；
②被檢組織細胞需含一定量抗原，如抗原太少，則難以被抗體標記；
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