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當(dāng)前位置:上海研生生化試劑有限公司>>技術(shù)文章>>熒光抗體染色間接法
間接法
(1)切片固定后用毛細(xì)滴管吸取經(jīng)適當(dāng)稀釋的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的濕度,37℃ 作用 30 min。然后用 0.01mol/l pH7.2PBS 洗兩次,10 min,用吸水吸去或吹干余留的液體。
(2)再滴加間接熒光抗體(如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體等),同上步驟,染色 30 min,37℃,緩沖鹽水洗兩次 10 min,攪拌,緩沖甘油封固,鏡檢。
對照染色:①抗體對照:用正常兔血清或人血清代替免疫血清,再用上法進行染色,結(jié)果應(yīng)為陰性。②抗原對照:即類屬抗原染色,亦應(yīng)為陰性。③陽性對照。
間接法中上述方法稱雙層法(Double Layer Method)。另一種稱夾心法,即用未標(biāo)記的特異性抗原加在切片上先與組織中之相應(yīng)抗體結(jié)合,再用該抗原之熒光抗體重疊結(jié)合其上,而間接地顯示出組織和細(xì)胞中抗體的存在,方法步驟如下:
①切片或涂片固定后,置于染色濕盒內(nèi)。
②滴加未標(biāo)記的特異性抗原作用切片于 37℃,30 min。
③緩沖鹽水洗 2 次,每次 5 min,吹干。
④滴加特異性熒光抗體再用切片于 37℃,30 min。
⑤如③水洗。
⑥緩沖甘油封固,鏡檢。
間接法只需制備一種熒光抗體可以檢出多種抗原,敏感性較高,操作方法較易掌握,而且能解決一些不易制備動物免疫血清的病原體(如麻疹)等的研究和檢查,所以已被廣泛應(yīng)用于自身抗體和感染病人血清的試驗。
英文名稱 Homo sapiens (Human) 核纖層蛋白B1(LMNB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 核纖層蛋白A/C(LMNA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 核纖層蛋白A/C(LMNA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Mus musculus (Mouse) 核纖層蛋白A/C(LMNA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 核糖體結(jié)合糖蛋白Ⅱ(RPN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 核糖體結(jié)合糖蛋白Ⅰ(RPN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
抗體英文名稱 Homo sapiens (Human) 核糖體蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 核糖體蛋白L6(RPL6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 核糖體蛋白L23A(RPL23A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 規(guī)格: 48T/96T
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