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實(shí)驗(yàn)步驟
1. *的提取
取已發(fā)芽的水稻或小麥種子(幼芽長3~4cm)20粒,放在研缽 中研磨,勻漿用100ml水分多次沖洗,集中于150ml三角瓶并充分?jǐn)嚢琛㈧o置1小時(shí)后,過濾入另一三角瓶,濾液中即含有*,若要短期保存時(shí),可加甲苯數(shù)滴防腐,并放入冰箱中。ELISA試劑盒
2. 溫度對活性的影響*
取試管5支,分別作15、30、45、60、75℃溫度標(biāo)記,并注明“酶液管",各加入酶提取液5ml;另取5支試管,也分別作15、30、45、60、75℃溫度標(biāo)記,并注明“淀粉液管",各加入0.5﹪淀粉液5ml;然后各管分別置于相對應(yīng)溫度的水浴 中,約5min后,待管內(nèi)外溫度一致,將酶液倒入相同溫度的淀粉液管中,搖勻并記下時(shí)間,10min后取出(不同處理之間,時(shí)間要一致),放入冰水中冷卻1min后,往每管加入I-KI溶液5滴,搖勻。觀察顏色有何不同,比較不同溫度對*活性的影響,判斷zui適宜的酶促作用溫度。
3. pH 對*活性的影響:
取4支中型試管,分別加入下列系列pH的磷酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液3ml,并作標(biāo)記:pH 3.6、4.8、6.0、7.2。每管加入淀粉液3ml和*提取液2ml,充分搖勻,記下時(shí)間,放置30℃左右溫度下20min后,向每管加入I-KI溶液5滴,搖勻,根據(jù)生成的顏色,比較*的活性。
4. 化學(xué)物質(zhì)對*活性的影響ELISA試劑盒
取6支試管,編上1~6號,每管加入*提取液1ml及pH5.0醋酸鹽緩沖液1ml,然后往1號管加蒸餾水1ml(對照)。2號管加1%NaCl 1ml,3號管加1%*1ml,4號管中加1%CuSO4 1ml,5號管加0.1%AgNO3 1ml,6號管加入0.1%HgCl2 (注意,有毒!)1ml,各管再加0.5%淀粉液2ml,搖勻后置于40℃恒溫水浴中,并記錄開始時(shí)間,保溫8~10min,取出試管,冷卻后向各管加入I-KI溶液5滴,搖勻,觀察各管顏色的差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及分析ELISA試劑盒
1. 用文字說明經(jīng)不同溫度,pH及各種化學(xué)物質(zhì)處理后各試管所顯示的顏色。
2. 用文字簡要分析環(huán)境條件對*活性的影響。
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