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上海一研生物科技有限公司

如何選擇培養(yǎng)基

時(shí)間:2016-4-14閱讀:135
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   選擇基本培養(yǎng)基時(shí),除待培養(yǎng)植物的基因型外,通常應(yīng)考慮培養(yǎng)基的種類,其總離子濃度、總氮水平及氮源種類(硝態(tài)氮和銨態(tài)氮)與比例、鈣和氯化物的含量等。草本植物組織培養(yǎng)廣泛使用的MS培養(yǎng)基,而木本植物組織培養(yǎng)通常采用低鹽基本培養(yǎng)基如1/2或1/4MS或WPM(Woody Plant Medium,木本植物培養(yǎng)基)。除總離子濃度外,總氮水平、氮源種類(硝態(tài)氮和銨態(tài)氮)與比例也對(duì)組織培養(yǎng)影響甚大,因此根據(jù)具體情況改變基本培養(yǎng)基的氮源類型和濃度,可以提高培養(yǎng)效果[15~17]。

   不同基因型可能需要不同的基本培養(yǎng)基,但同一種植物在培養(yǎng)的不同階段或適用于不同的培養(yǎng)目的時(shí),所需基本培養(yǎng)基也不同。通常按培養(yǎng)階段和目的可劃分為啟動(dòng)或誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基等多種,這種劃分可能僅僅是激素的調(diào)整,或同一基本培養(yǎng)基某些成分的改變,甚至基本培養(yǎng)基種類的不同。如大多數(shù)植物在生根培養(yǎng)時(shí)使用1/2~1/4 MS或其他低鹽培養(yǎng)基如White培養(yǎng)基,體細(xì)胞胚胎發(fā)生也經(jīng)常在不同階段要改變氮源的類型和比例等。基本培養(yǎng)基種類也可能影響到生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的作用效果,因此需要考慮不同基本培養(yǎng)基與不同濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)之間的互作。

通常在對(duì)一種植物進(jìn)行組織培養(yǎng)前,首先應(yīng)查尋同屬、同種或同品種植物組織培養(yǎng)的有關(guān)資料,參考前人的研究成果。無法查找到有關(guān)資料,可以一些的基本培養(yǎng)基如MS、WPM或B5等開始試驗(yàn)。如果對(duì)現(xiàn)有的基本培養(yǎng)基的篩選效果不理想,可以以MS、WPM或B5等基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)進(jìn)行改良,改良的方法一般有以下幾種:

 (1)將基本培養(yǎng)基的大量成分或無機(jī)鹽成分減半至減四分之三(1/2,1/3,2/3,1/4,或3/4),或不同基本培養(yǎng)基成分組合如將B5的無機(jī)鹽成分與MS的有機(jī)成分組合在一起等;
 (2)增減氮源水平及調(diào)銨態(tài)氮和硝態(tài)氮(銨鹽和硝酸鹽)的種類和比例,氮源通常對(duì)培養(yǎng)物的質(zhì)量和發(fā)育路線影響較大;
 (3)增加鈣鹽,以改善木本植物培養(yǎng)中的鈣缺乏;
 (4)附加*、氨基酸及有機(jī)添加物,這對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求復(fù)雜或難培養(yǎng)的植物較為有效;
 (5)對(duì)植物生長(zhǎng)土壤及體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定,給基本培養(yǎng)基改良提供參考;
 (6)將無機(jī)鹽、有機(jī)成分及生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素劃分為高、中、低三個(gè)水平,進(jìn)行81(34)種組合試 驗(yàn),這樣更為。總之,可通過培養(yǎng)基質(zhì)量(成分)和數(shù)量(濃度)調(diào)整,優(yōu)化和選擇與既定植物材料的特定要求相適合的基本培養(yǎng)培養(yǎng)基。

     植物組織培養(yǎng)基中經(jīng)常改變的因子是生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì),尤其是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的種類、數(shù)量和比例通常根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或激素的性質(zhì)與功能確定。但更科學(xué)的方法是采用單因子試驗(yàn)法和多因子試驗(yàn)法(正交設(shè)計(jì)),這樣可以采用生物統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。如以一種基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ),將生長(zhǎng)素(如NAA)和細(xì)胞分裂素(如BA)各以 9種濃度水平(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mg/l)組合成81種處理,可以得到的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素濃度水平的組合。正交設(shè)計(jì)雖然科學(xué)合理,考慮到了兩類激素之間的互作,但工作量較大。

     實(shí)踐中也可以采用固定生長(zhǎng)素濃度,改變細(xì)胞分裂素種類或濃度,選擇*的細(xì)胞分裂素種類和濃度;以及反過采用同樣的方法也可對(duì)生長(zhǎng)素進(jìn)行選擇。或者有時(shí)為減少工作量,可代表性地配制數(shù)量較少的幾種組合(如生長(zhǎng)素濃度相對(duì)高的一種,細(xì)胞分裂素濃度高的一種,生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素相平衡的一種),首先確定那類較為適合,然后根據(jù)適合的一類,利用單因子或多因子試驗(yàn)法進(jìn)一步確定zui適激素組合。確定zui適光照和溫度等因子的方法也同此。

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