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　　曲妥珠單抗是一種抗 Her2 的重組 DNA 衍生的人源化單克隆抗體，它通過將自己附著在 Her2 上來阻止人體表皮生長因子在 Her2 上的附著，從而阻斷癌細胞的生長，曲妥珠單抗還可以刺激身體自身的免疫細胞去摧毀癌細胞。隨著曲妥珠單抗在臨床的廣泛應用，對該藥物在人體血漿中定量檢測的精密度和準確度要求也日益提高。
 

　　隨著液相色譜和質譜技術以及生物樣品分離技術的發展，LC-MS/MS 定量技術在蛋白質定量研究中的應用日益廣泛。相對于傳統的免疫分析方法(例如 ELISA)，LC-MS/MS定量技術提高了蛋白分析的精密度和準確度。基于質譜法的蛋白定量在抗體藥物臨床前及臨床研究中受到越來越多的關注，為了使蛋白質定量技術與藥物研究和臨床檢驗更加緊密結合，島津公司將其超快速液相色譜-質譜聯用平臺和強大的定量蛋白質組學軟件 Skyline集成一體。根據蛋白質序列和用戶自定義，Skyline 軟件可以用來設計、改善以及優化選擇反應監測(SRM)/多反應監測(MRM)、全掃描質譜和串聯質譜定量法。Skyline 軟件不僅將結果和方法優化結合起來，也為蛋白質定量的研究工作提供了標準化的工作流程。同時島津研發工程師們為簡化復雜生物基質中抗體藥物的定量分析工作，對抗體藥物前處理過程進行了*的設計，發明了 nSMOL 前處理試劑包，該方法能夠有效富集血漿/血清中的抗體藥物，實現 Fab 區域的選擇性酶解，提高酶解效率，極大降低了酶解產物的復雜性，對于
 

　　復雜生物基質中抗體藥物的準確定量提供了非常有利的工具。
 

　　本文建立了一種使用島津超液相色譜儀 LC-30A 和三重四極桿質譜儀 LCMS-8060與Skyline軟件聯用建立血漿中曲妥珠單抗定量分析的工作流程。結合nSMOL前處理技術，實現抗體藥物 Fab 區域選擇性酶解，從而顯著降低了方法開發的復雜程度。在本實驗篩選階段，共有 10 個肽段具有明顯的色譜峰，其中 8 條肽段與曲妥珠單抗的 Fab 區域相關，而曲妥珠單抗具有代表性的特異性肽段集中于 Fab 區域，充分體現了 nSMOL 技術的高選擇性，從而極大地降低了酶解產物的復雜性，提高方法開發的速度。實驗通過 Skyline 軟件完成MRM 通道的設計和方法的輸出，LabSolutions 基于 Skyline 導出的 MRM 分析方法，進行肽段篩選、碰撞能量優化，zui終確認曲妥珠單抗的特征肽段及其對應的 MRM 離子對。基于以上所建立的方法，本文完成血漿中曲妥珠單抗藥物的定量分析方法開發，定量特征肽段為IYPTNGYTR(542.80>404.70)，線性范圍為 0.122 μg/mL~125 μg/mL。
 

　　了解詳情，敬請點擊《基于nSMOL技術和Skyline軟件的曲妥珠單抗LC-MS/MS定量分析方法開發》