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豐壽(上海)生物科技有限公司

胚胎干細胞培養方法

時間:2016-5-5閱讀:138
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干細胞因它們能夠分化為一系列成熟細胞類型而聞名,但是它們不能獨立維持這種可塑性。在體內,相鄰的細胞有助于維持干細胞的這種“多能性”狀態。但是在體外培養這些細胞,科學家們不得不設計出多種特殊的技術。這對胚胎干細胞(ESC)和誘導性多能干細胞(iPSC)而言,尤其如此。為了保持它們的多能性,這些細胞通常在由“飼養細胞”組成的支持層的上面進行培養。
飼養細胞給干細胞提供有價值的生長因子,同時也使得體外培養復雜化,而且也可能產生污染---對臨床應用而言,這是一個特別嚴重的問題。找出飼養細胞關鍵特征的早期努力一直不符合標準。Ito說,“在固定有生長因子的基質(substrate)上培養干細胞一直比較困難。飼養細胞提供一種復雜的微環境,但是這種微環境不能夠通過一種或幾種生長因子來替代。”
作為一種替代選擇,研究人員對飼養細胞層進行化學固定處理,這種處理殺死細胞,在物理上保存它們的完整性,同時維持它們的外部結構在很大程度上完好無損。這就產生堅實的細胞培養表面,而且這些表面保存著幾乎所有的通常與干細胞發生相互作用的特征。小鼠iPSC甚至在之前經過甲醛或戊二醛固定的飼養細胞上大量培養之后仍然保持它們的多能性狀態。戊二醛固定是一種嚴苛的處理,然而Ito和同事們注意到戊二醛固定的細胞也提供一種*的基質,而且這種戊二醛固定的細胞層足夠堅實,能夠經受沖洗和反復使用。
研究人員非常吃驚地發現以這種方式培養的小鼠iPSC幾乎與利用傳統方法培養的那些細胞沒有什么差別。Ito說,“人們認為飼養細胞分泌維持未分化干細胞生長的蛋白或其他化合物。但是固定的細胞失去了這種分泌能力,這就證明提供合適的接觸微環境對iPSC而言更加重要。”考慮到固定的細胞層非常堅固,他期待一旦這種方法在培養人iPSC上經過驗證和*化后,它就可能在商業上提供一種活細胞培養工具。

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