小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289）Elisa測定試劑盒樣本要求
在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。我們提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，請造模取材后，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質量，所以避免反復凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項請與我司技術人員溝通。

液體類標本：標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。

血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

血漿：應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（*）。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

三、寄標本時需注明以下情況：
1、標本編號；2、所測項目；3、是否做復孔；3、；4、實驗后標本是否寄回。

客戶須知：
客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

 Pharmacokinetics of ginsenoside Re in rat

 Abstract:Objective To develop a HPLC method for the determination of ginsenoside Re concentrations in rat plasma samples and to research pharmacokinetics of the concentration-time parameter of ginsenoside Re in rats after iv. Methods The pharmacokinetic characteristics were calculated after iv of 20, 30 and 40 mg·kg^- 1 ginsenoside Re in rats. Results The main parameters t 1/2（α） were 6. 505, 6. 817 and 4. 499 min respectively, t 1/2（α） were 28.96, 30.49 and 27.57 min respectively, The AUC were 599.31, 1025.65, 1415.7 mg·L^-1, min respectively, the main parameters are similar. Conclusions The result that the AUC values are directly relative to the doses indicates that the elimination of ginsenoside Re is linear pharmacokinetics.[著者文摘]

 Key words:ginsenoside Re; HPLC; pharmacokinetics

小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289）Elisa測定試劑盒是人參皂苷的一類主要有效成分，質量分數約占總 皂苷的30％。人參皂苷Re具有較強的抗缺血性 心律失常作用n ；起到自由基陷阱作用，可以保護 所有的未飽和脂肪酸，阻止其被氧化，有顯著的抗 衰老功能 ；XCd’鼠的體液免疫和細胞免疫均有刺 激作用，增強免疫功能。此外人參皂苷Re還具有 較強的鎮靜作用及抗利尿作用，對東莨菪堿造成的 小鼠功能性損傷具有很好的修復作用L3 J。另據文 獻[4]報道，人參皂苷Re還是人參皂苷中降低醋酸 *不良反應的主要成分，同時具有刺激蛋白酶 的分泌【5J，增強藥物的透皮吸收的功能 6。

 目前國內外對人參皂苷的研究側重于植物化 學和藥理學。近二十年來，雖對人參皂苷Rgl和 Rbl的藥動學研究可見報道【7-9 J，但對人參皂苷 Re的藥物動力學研究尚未見文獻報道。

 1 儀器與材料

 Perkin Elmer型高效液相色譜儀(1022泵，Spectra Focus檢測器，美國PE公司)，YKH型液 體快速混合器(江西科研廠)，SLJ—II型電動 離心機(沈陽市理化儀器廠)，SCQ一50型超聲波 清洗機(上海申波超聲公司)，電熱恒溫水浴鍋(江 蘇省東臺市電器廠)。

 人參皂苷Re、*(HPLC面積歸一化法測 定純度質量分數分別為99．5％、99．1％，自制，沈 陽藥科大學天然藥化教研室提供)，無水乙醇(分 析純，山東禹王化學試劑廠)，磷酸、正丁醇(分析 純，天津化學試劑廠)，甲醇、乙腈(色譜純，山東禹 王化學試劑廠)，水為重蒸餾水。

 Wistar大鼠，體質量200～260 g，雌雄兼用， 沈陽藥科大學實驗動物中心提供，合格證號： SCXK(遼)2003-008。

 2 方法與結果

 2．1 色譜條件選擇

 色譜柱：HYPERSIL ODS(10肛m，200 mm× 4．6 mm，)，流動相：乙腈一甲醇一水一磷酸 (體積比為18．40：27．50：54．10：0．05)，流速： 0．8 mL·min～，檢測波長：207 nm，柱溫：20℃ ， 進樣量：20 L。

 2．2 標準溶液及內標溶液的配制

 精密稱取人參皂苷Re適量，用無水甲醇溶 解配制成1 mg·I -1的標準儲備液，稀釋標準儲備 液得100 mg·L 標準工作液。內標物*用無水甲醇溶解配成100 mg·L-1內標儲備液，稀釋 內標儲備液得20 mg·L-1的內標工作液，置冰箱 中冷凍保存。

 2．3 給藥方法

 對大鼠實施頸靜脈持久性插管術[ 】，術后大 鼠單籠飼養，72 h后供實驗使用，在每次取血的 間隔內將導管內充滿100 mg·L-1肝素生理鹽水 以防血凝。大鼠實驗前禁食12 h交叉靜注20、 30、40 mg·kg-1不同劑量的人參皂苷Re注射液， 交叉實驗的實驗間隔為72 h。于給藥前和給藥后 5、10、20、30、45、60、90、120 min各取血250 L置 于涂有肝素的塑料離心管中，離心(3 000 r·min-1) 5 rain，取血漿100肚L，置于冰柜(一18℃)中保存待測。

 2．4 血漿樣品的處理

 精密吸取血漿樣品100 L置5．0 mL具塞 離心試管中，加入2 mI 正丁醇和20 L內標工 作液，置液體快速混合器上振蕩5 min。離心 (5 000 r·min-1)10 min，移取上清液，氮氣吹干， 用流動相溶解。離心(10 000 r·min-1)10 min，取 上清液進樣20肚L。

 2．5 專屬性考察

 按“2．4”條方法操作。實驗條件下，血漿中雜 質不干擾樣品及內標物的測定，人參皂苷Re及 內標物*的保留時間分別為15 min和 17 min，色譜圖見圖2。

 A- Blank plasma；B- Blank plasma with gensingnoside Re；C- Blank plasma with puerarin；D---Plasma sample with puer— arin：1- gensingnoside Re；2一Puerarin

 Fig．2 HPLC chromatograms of gensingnoside Re and internal standard(puerarin)in rat plasma

 2．6 標準曲線的制備

 分別于一系列試管中加入人參皂苷Re及空白大鼠血漿100肚L，使各管濃度分別為1、5、15、30、45、75、100 mg·L～，按“2．4”條操作，重復操作5次，以人參皂苷Re與內標物峰面積的比值(Ai／As)為縱坐標，人參皂苷Re的質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程及相關系數。本方法在1～100 mg·L-1內線性關系良好，回歸方程為R=0．039 9p一0．024 4，r=0．999 2。其中R為人參皂苷Re與內標物lD峰面積的比值，l為人參皂苷Re的質量濃度。

 2．7 精密度與準確度

 取空白大鼠血漿100 L，按“2．6”條方法配制低、中、高3個質量濃度(分別為5、30、100 mg·L-1)的人參皂苷Re樣品，進行6個樣品分析，連續測定3 d，用當日標準曲線計算人參皂苷Re樣品的質量濃度，從而考察方法的精密度與準確度，結果見表1。

 Table I Accuracy and precision of the HPLC assay gensingnoside Re in the rat plasma(Jl 6)

 2．8 血藥質量濃度測定

 樣品測定時隨行標準曲線，把待測物與內標 物的峰面積之比代入當天的標準曲線，計算出未 知樣品的質量濃度，以人參皂苷Re樣品是否合 格決定該樣品測定結果的取舍。

 2．9 大鼠靜脈注射不同劑量(20、30、40 mg·kg-1 的人參皂苷Re的藥物動力學參數和平均血藥質 量濃度一時間曲線

 大鼠靜注3種不同劑量的人參皂苷Re注射 液，平均血藥質量濃度一時間曲線見圖3。

 將低、中、高3個劑量組的血藥質量濃度一時 間數據用3P87藥物動力學程序處理后，得三者 的藥物動力學參數，結果見表2。結果表明，大鼠 靜注低、中、高3個劑量組的人參皂苷Re后，3組 的藥物動力學特點成雙隔室模型。3種不同劑量 的tl／2(口)、V(c)、C1等主要動力學參數十分相近， 經統計學t檢驗無顯著性差異(P>0．05)，且AUC隨劑量增加而成比例增加，說明在此劑量范 圍內人參皂苷Re的消除為線性動力學。

 3 討論

 大鼠經靜脈注射給藥人參皂苷Re 40 mg·kg-1后，藥時曲線符合二室開放模型 tl／2( )為4．499 min，提示人參皂苷Re自*室向周邊室分布迅速，tI12(f1)為27．57 min，提示人 參皂苷Re在體內消除迅速，表觀分布容積Vc為 0．33 L·kg～，約為大鼠平均血容量l5倍，提示該 藥分布廣泛。

 由于小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289）Elisa測定試劑盒檢測波長為207 nm，干擾 因素較多，又因其在正丁醇中的溶解度zui大，考查 了分別用1．0、1．5、2．0、2．5 mL正丁醇萃取和分 別用1．0、2．0 mL甲醇沉淀的方法提取血漿中的 樣品，在50～60℃水浴中用氮氣吹干，用流動相 溶解。離心(10 000 r·rainI1)10 rain，取上清液進 樣20肛L。比較HPI C圖譜，以分離效果、雜質含 量及提取率為綜合指標，確定采用2．0 mL正丁 醇萃取的方法進行血漿樣品處理，效果較好。

人超敏生長激素(US-GH）Elisa檢測試劑盒 Human Ultra Sensitive growth hormone,U S-GH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人超敏前列腺特異性抗原(PSA-US）Elisa檢測試劑盒 Human Ultra Sensitive Prostate Specific Antigen,PSA U S ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*/苯丙酸去*(NP）Elisa檢測試劑盒 Human Nandrolone Phenylpropionate,NP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人16α羥基雌酮1(16-αOHE-1）Elisa檢測試劑盒 Human 16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*(HYD）Elisa檢測試劑盒 Human Hydrocortisone,HYD ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人糖皮質激素受體β(GR-β）Elisa檢測試劑盒 Human glucocorticoid receptor-β,GR-β ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人糖皮質激素受體α(GR-α）Elisa檢測試劑盒 Human glucocorticoid receptor-α,GR-α ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3）Elisa檢測試劑盒 Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人黃體生成素釋放激素(LHRH）Elisa檢測試劑盒 Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人8異前列腺素(8-iso-PG）Elisa檢測試劑盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人腎素(Renin）Elisa檢測試劑盒 Human Renin ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人腎上腺素(EPI）Elisa檢測試劑盒 Human Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌二醇受體(ER）Elisa檢測試劑盒 Human Estradiol receptor,ER ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP）Elisa檢測試劑盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血管緊張素原(aGT）Elisa檢測試劑盒 Human angiotensinogen,aGT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ）Elisa檢測試劑盒 Human angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人卵泡抑素(FS）Elisa檢測試劑盒 Human Follistatin,FS ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀腺素抗體(TAb）Elisa檢測試劑盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人兒茶酚胺(CA）Elisa檢測試劑盒 Human catecholamine,CA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C）Elisa檢測試劑盒 Human Cystatin C,Cys-C ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人乙酰*受體抗體(AChRab）Elisa檢測試劑盒 Human acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人5羥色胺(5-HT）Elisa檢測試劑盒 Human 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人抑制素A(INH-A）Elisa檢測試劑盒 Human Inhibin,INH-A ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人性激素結合球蛋白(SHBG）Elisa檢測試劑盒 Human sex hormone-binding globulin,SHBG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脫氫表雄酮S7(DHEA-S7）Elisa檢測試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脫氫表雄酮(DHEA）Elisa檢測試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人降鈣素基因相關肽(CGRP）Elisa檢測試劑盒 Human calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*(SS）Elisa檢測試劑盒 Human Somatostatin,SS ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人生長激素釋放多肽(GHRP）Elisa檢測試劑盒試劑盒 Human Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人抑制素B(INH-B）Elisa檢測試劑盒 Human inhibin B,INH-B ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促甲狀腺素釋放激素(TRH）Elisa檢測試劑盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌激素(E）Elisa檢測試劑盒 Human estrogen,E ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人褪黑素(MT）Elisa檢測試劑盒 Human Melatonin,MT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人6酮前列腺素(6-K-PG）Elisa檢測試劑盒 Human 6-keto-prostaglandin,6-K-PG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血栓素B2(TXB2）Elisa檢測試劑盒 Human Thromboxane B2,TX-B2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人皮質酮/腎上腺酮(CORT）Elisa檢測試劑盒 Human Corticosterone,CORT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素E2(PGE2）Elisa檢測試劑盒 Human Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雙氫睪酮(DHT）Elisa檢測試劑盒 Human Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促生長激素釋放激素(GHRH）Elisa檢測試劑盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌激素(E）Elisa檢測試劑盒 Human estrogen,E ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人孕激素/孕酮(PROG）Elisa檢測試劑盒 Human Progesterone,PROG ELISA kit ELISA.  96T/48T
人超敏游離雌三醇(uE3）Elisa檢測試劑盒 Human ultra Estriol,uE3 ELISA KIT  ELISA.  96T/48T
人*(NA）Elisa檢測試劑盒試劑盒 human Noradrenaline,NA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素F(PGF）Elisa檢測試劑盒 human Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素E1(PGE1）Elisa檢測試劑盒 human Prostaglandin E1,PG-E1 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人內皮素1(ET-1）Elisa檢測試劑盒 human Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人促卵泡素(FSH）Elisa檢測試劑盒 Human follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人游離β絨毛膜*(f-βhCG）Elisa檢測試劑盒 human free chorionic gonadotropin,f-βhCG ELISA KIT ELISA.  96T/48T
人大內皮素(BigET）Elisa檢測試劑盒 Human Big Endothelin,Big ET ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人全段甲狀旁腺素(i-PTH）Elisa檢測試劑盒 Human intact Parathormone ,i-PTH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人降鈣素(CT）Elisa檢測試劑盒 Human Calcitonin,CT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促甲狀腺素(TSH）Elisa檢測試劑盒 Human Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人*(Cortisol）Elisa檢測試劑盒 Human Cortisol ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌二醇(E2）Elisa檢測試劑盒 Human Estradiol,E2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S）Elisa檢測試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人睪酮(T）Elisa檢測試劑盒 Human Testoterone,T ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人游離睪酮(F-TESTO）Elisa檢測試劑盒 Human Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雄烯二酮(ASD）Elisa檢測試劑盒 Human Androstenedione,ASD ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌三醇(E3）Elisa檢測試劑盒 Human Estriol,E3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人17羥孕酮(17-OHP）Elisa檢測試劑盒 Human 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人三碘甲狀腺原氨酸(T3）Elisa檢測試劑盒 Human Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀腺素(T4）Elisa檢測試劑盒 Human thyroxine,T4 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀腺素(T4）Elisa檢測試劑盒 Human thyroxine,T4 ELISA Kit ELISA.  96T/48T