人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO）Elisa檢測試劑盒大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究
    摘　要:目的研究人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO）Elisa檢測試劑盒在大鼠體內(nèi)的經(jīng)時(shí)過程并計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。方法采用HPLC法測定大鼠靜脈注射給藥后血漿中人參皂苷Re的血藥質(zhì)量濃度，用3P87藥動(dòng)學(xué)程序求算其藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果靜脈注射3種不同劑量（20、30、40mg·kg^-）的人參皂苷Re后，3組大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)成雙隔室模型。t1／2（α）分別為6．505、6．817、4．499min，t1／2（α）分別為28．96、30．49、27．57min，AUC分別為599．31、1025．65、1415．7min·mg·L^-1。結(jié)論主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)十分相近，且AUC隨劑量增加而成比例增加，說明在此劑量范圍內(nèi)Re的消除為線性動(dòng)力學(xué)。[著者文摘]
 關(guān)鍵詞:人參皂苷Re 藥物動(dòng)力學(xué) 高效液相色譜法

 Pharmacokinetics of ginsenoside Re in rat

 Abstract:Objective To develop a HPLC method for the determination of ginsenoside Re concentrations in rat plasma samples and to research pharmacokinetics of the concentration-time parameter of ginsenoside Re in rats after iv. Methods The pharmacokinetic characteristics were calculated after iv of 20, 30 and 40 mg·kg^- 1 ginsenoside Re in rats. Results The main parameters t 1/2（α） were 6. 505, 6. 817 and 4. 499 min respectively, t 1/2（α） were 28.96, 30.49 and 27.57 min respectively, The AUC were 599.31, 1025.65, 1415.7 mg·L^-1, min respectively, the main parameters are similar. Conclusions The result that the AUC values are directly relative to the doses indicates that the elimination of ginsenoside Re is linear pharmacokinetics.[著者文摘]

 Key words:ginsenoside Re; HPLC; pharmacokinetics

人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO）Elisa檢測試劑盒(gensingnoside Re，結(jié)構(gòu)式見圖1) 是人參皂苷的一類主要有效成分，質(zhì)量分?jǐn)?shù)約占總 皂苷的30％。人參皂苷Re具有較強(qiáng)的抗缺血性 心律失常作用n ；起到自由基陷阱作用，可以保護(hù) 所有的未飽和脂肪酸，阻止其被氧化，有顯著的抗 衰老功能 ；XCd’鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫均有刺 激作用，增強(qiáng)免疫功能。此外人參皂苷Re還具有 較強(qiáng)的鎮(zhèn)靜作用及抗利尿作用，對東莨菪堿造成的 小鼠功能性損傷具有很好的修復(fù)作用L3 J。另據(jù)文 獻(xiàn)[4]報(bào)道，人參皂苷Re還是人參皂苷中降低醋酸 *不良反應(yīng)的主要成分，同時(shí)具有刺激蛋白酶 的分泌【5J，增強(qiáng)藥物的透皮吸收的功能 6。

 目前國內(nèi)外對人參皂苷的研究側(cè)重于植物化 學(xué)和藥理學(xué)。近二十年來，雖對人參皂苷Rgl和 Rbl的藥動(dòng)學(xué)研究可見報(bào)道【7-9 J，但對人參皂苷 Re的藥物動(dòng)力學(xué)研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。

 1 儀器與材料

 Perkin Elmer型高效液相色譜儀(1022泵，Spectra Focus檢測器，美國PE公司)，YKH型液 體快速混合器(江西科研廠)，SLJ—II型電動(dòng) 離心機(jī)(沈陽市理化儀器廠)，SCQ一50型超聲波 清洗機(jī)(上海申波超聲公司)，電熱恒溫水浴鍋(江 蘇省東臺(tái)市電器廠)。

 人參皂苷Re、*(HPLC面積歸一化法測 定純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為99．5％、99．1％，自制，沈 陽藥科大學(xué)天然藥化教研室提供)，無水乙醇(分 析純，山東禹王化學(xué)試劑廠)，磷酸、正丁醇(分析 純，天津化學(xué)試劑廠)，甲醇、乙腈(色譜純，山東禹 王化學(xué)試劑廠)，水為重蒸餾水。

 Wistar大鼠，體質(zhì)量200～260 g，雌雄兼用， 沈陽藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號： SCXK(遼)2003-008。

 2 方法與結(jié)果

 2．1 色譜條件選擇

 色譜柱：HYPERSIL ODS(10肛m，200 mm× 4．6 mm，)，流動(dòng)相：乙腈一甲醇一水一磷酸 (體積比為18．40：27．50：54．10：0．05)，流速： 0．8 mL·min～，檢測波長：207 nm，柱溫：20℃ ， 進(jìn)樣量：20 L。

 2．2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)溶液的配制

 精密稱取人參皂苷Re適量，用無水甲醇溶 解配制成1 mg·I -1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 液得100 mg·L 標(biāo)準(zhǔn)工作液。內(nèi)標(biāo)物*用無水甲醇溶解配成100 mg·L-1內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，稀釋 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液得20 mg·L-1的內(nèi)標(biāo)工作液，置冰箱 中冷凍保存。

 2．3 給藥方法

 對大鼠實(shí)施頸靜脈持久性插管術(shù)[ 】，術(shù)后大 鼠單籠飼養(yǎng)，72 h后供實(shí)驗(yàn)使用，在每次取血的 間隔內(nèi)將導(dǎo)管內(nèi)充滿100 mg·L-1肝素生理鹽水 以防血凝。大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12 h交叉靜注20、 30、40 mg·kg-1不同劑量的人參皂苷Re注射液， 交叉實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)間隔為72 h。于給藥前和給藥后 5、10、20、30、45、60、90、120 min各取血250 L置 于涂有肝素的塑料離心管中，離心(3 000 r·min-1) 5 rain，取血漿100肚L，置于冰柜(一18℃)中保存待測。

 2．4 血漿樣品的處理

 精密吸取血漿樣品100 L置5．0 mL具塞 離心試管中，加入2 mI 正丁醇和20 L內(nèi)標(biāo)工 作液，置液體快速混合器上振蕩5 min。離心 (5 000 r·min-1)10 min，移取上清液，氮?dú)獯蹈桑?用流動(dòng)相溶解。離心(10 000 r·min-1)10 min，取 上清液進(jìn)樣20肚L。

 2．5 專屬性考察

 按“2．4”條方法操作。實(shí)驗(yàn)條件下，血漿中雜 質(zhì)不干擾樣品及內(nèi)標(biāo)物的測定，人參皂苷Re及 內(nèi)標(biāo)物*的保留時(shí)間分別為15 min和 17 min，色譜圖見圖2。

 A- Blank plasma；B- Blank plasma with gensingnoside Re；C- Blank plasma with puerarin；D---Plasma sample with puer— arin：1- gensingnoside Re；2一Puerarin

 Fig．2 HPLC chromatograms of gensingnoside Re and internal standard(puerarin)in rat plasma

 2．6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

 分別于一系列試管中加入人參皂苷Re及空白大鼠血漿100肚L，使各管濃度分別為1、5、15、30、45、75、100 mg·L～，按“2．4”條操作，重復(fù)操作5次，以人參皂苷Re與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值(Ai／As)為縱坐標(biāo)，人參皂苷Re的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。本方法在1～100 mg·L-1內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為R=0．039 9p一0．024 4，r=0．999 2。其中R為人參皂苷Re與內(nèi)標(biāo)物lD峰面積的比值，l為人參皂苷Re的質(zhì)量濃度。

 2．7 精密度與準(zhǔn)確度

 取空白大鼠血漿100 L，按“2．6”條方法配制低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度(分別為5、30、100 mg·L-1)的人參皂苷Re樣品，進(jìn)行6個(gè)樣品分析，連續(xù)測定3 d，用當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算人參皂苷Re樣品的質(zhì)量濃度，從而考察方法的精密度與準(zhǔn)確度，結(jié)果見表1。

 Table I Accuracy and precision of the HPLC assay gensingnoside Re in the rat plasma(Jl 6)

 2．8 血藥質(zhì)量濃度測定

 樣品測定時(shí)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，把待測物與內(nèi)標(biāo) 物的峰面積之比代入當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出未 知樣品的質(zhì)量濃度，以人參皂苷Re樣品是否合 格決定該樣品測定結(jié)果的取舍。

 2．9 大鼠靜脈注射不同劑量(20、30、40 mg·kg-1 的人參皂苷Re的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)和平均血藥質(zhì) 量濃度一時(shí)間曲線

 大鼠靜注3種不同劑量的人參皂苷Re注射 液，平均血藥質(zhì)量濃度一時(shí)間曲線見圖3。

 將低、中、高3個(gè)劑量組的血藥質(zhì)量濃度一時(shí) 間數(shù)據(jù)用3P87藥物動(dòng)力學(xué)程序處理后，得三者 的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，大鼠 靜注低、中、高3個(gè)劑量組的人參皂苷Re后，3組 的藥物動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)成雙隔室模型。3種不同劑量 的tl／2(口)、V(c)、C1等主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)十分相近， 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)無顯著性差異(P>0．05)，且AUC隨劑量增加而成比例增加，說明在此劑量范 圍內(nèi)人參皂苷Re的消除為線性動(dòng)力學(xué)。

 3 討論

 大鼠經(jīng)靜脈注射給藥人參皂苷Re 40 mg·kg-1后，藥時(shí)曲線符合二室開放模型 tl／2( )為4．499 min，提示人參皂苷Re自*室向周邊室分布迅速，tI12(f1)為27．57 min，提示人 參皂苷Re在體內(nèi)消除迅速，表觀分布容積Vc為 0．33 L·kg～，約為大鼠平均血容量l5倍，提示該 藥分布廣泛。

 單純以甲醇、水為流動(dòng)相時(shí)，人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO）Elisa檢測試劑盒的峰形不好，拖尾，且分離不*。加入乙腈及磷 酸調(diào)節(jié)峰形，zui后確定配比為乙腈一甲醇一 水一磷酸(體積比為18．40：27．50：54．10：0．05)， 與血樣中內(nèi)源性物質(zhì)分離良好。

 由于人參皂苷Re檢測波長為207 nm，干擾 因素較多，又因其在正丁醇中的溶解度zui大，考查 了分別用1．0、1．5、2．0、2．5 mL正丁醇萃取和分 別用1．0、2．0 mL甲醇沉淀的方法提取血漿中的 樣品，在50～60℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑昧鲃?dòng)相 溶解。離心(10 000 r·rainI1)10 rain，取上清液進(jìn) 樣20肛L。比較HPI C圖譜，以分離效果、雜質(zhì)含 量及提取率為綜合指標(biāo)，確定采用2．0 mL正丁 醇萃取的方法進(jìn)行血漿樣品處理，效果較好。

人超敏生長激素(US-GH）Elisa檢測試劑盒 Human Ultra Sensitive growth hormone,U S-GH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人超敏前列腺特異性抗原(PSA-US）Elisa檢測試劑盒 Human Ultra Sensitive Prostate Specific Antigen,PSA U S ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*/苯丙酸去*(NP）Elisa檢測試劑盒 Human Nandrolone Phenylpropionate,NP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人16α羥基雌酮1(16-αOHE-1）Elisa檢測試劑盒 Human 16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*(HYD）Elisa檢測試劑盒 Human Hydrocortisone,HYD ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β）Elisa檢測試劑盒 Human glucocorticoid receptor-β,GR-β ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α）Elisa檢測試劑盒 Human glucocorticoid receptor-α,GR-α ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3）Elisa檢測試劑盒 Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人黃體生成素釋放激素(LHRH）Elisa檢測試劑盒 Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人8異前列腺素(8-iso-PG）Elisa檢測試劑盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人腎素(Renin）Elisa檢測試劑盒 Human Renin ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人腎上腺素(EPI）Elisa檢測試劑盒 Human Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌二醇受體(ER）Elisa檢測試劑盒 Human Estradiol receptor,ER ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP）Elisa檢測試劑盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血管緊張素原(aGT）Elisa檢測試劑盒 Human angiotensinogen,aGT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ）Elisa檢測試劑盒 Human angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人卵泡抑素(FS）Elisa檢測試劑盒 Human Follistatin,FS ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀腺素抗體(TAb）Elisa檢測試劑盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人兒茶酚胺(CA）Elisa檢測試劑盒 Human catecholamine,CA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C）Elisa檢測試劑盒 Human Cystatin C,Cys-C ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人乙酰*受體抗體(AChRab）Elisa檢測試劑盒 Human acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人5羥色胺(5-HT）Elisa檢測試劑盒 Human 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人抑制素A(INH-A）Elisa檢測試劑盒 Human Inhibin,INH-A ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG）Elisa檢測試劑盒 Human sex hormone-binding globulin,SHBG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脫氫表雄酮S7(DHEA-S7）Elisa檢測試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脫氫表雄酮(DHEA）Elisa檢測試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP）Elisa檢測試劑盒 Human calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*(SS）Elisa檢測試劑盒 Human Somatostatin,SS ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人生長激素釋放多肽(GHRP）Elisa檢測試劑盒試劑盒 Human Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人抑制素B(INH-B）Elisa檢測試劑盒 Human inhibin B,INH-B ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促甲狀腺素釋放激素(TRH）Elisa檢測試劑盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌激素(E）Elisa檢測試劑盒 Human estrogen,E ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人褪黑素(MT）Elisa檢測試劑盒 Human Melatonin,MT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人6酮前列腺素(6-K-PG）Elisa檢測試劑盒 Human 6-keto-prostaglandin,6-K-PG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血栓素B2(TXB2）Elisa檢測試劑盒 Human Thromboxane B2,TX-B2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT）Elisa檢測試劑盒 Human Corticosterone,CORT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素E2(PGE2）Elisa檢測試劑盒 Human Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雙氫睪酮(DHT）Elisa檢測試劑盒 Human Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促生長激素釋放激素(GHRH）Elisa檢測試劑盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌激素(E）Elisa檢測試劑盒 Human estrogen,E ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人孕激素/孕酮(PROG）Elisa檢測試劑盒 Human Progesterone,PROG ELISA kit ELISA.  96T/48T
人超敏游離雌三醇(uE3）Elisa檢測試劑盒 Human ultra Estriol,uE3 ELISA KIT  ELISA.  96T/48T
人*(NA）Elisa檢測試劑盒試劑盒 human Noradrenaline,NA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素F(PGF）Elisa檢測試劑盒 human Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素E1(PGE1）Elisa檢測試劑盒 human Prostaglandin E1,PG-E1 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人內(nèi)皮素1(ET-1）Elisa檢測試劑盒 human Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人促卵泡素(FSH）Elisa檢測試劑盒 Human follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人游離β絨毛膜*(f-βhCG）Elisa檢測試劑盒 human free chorionic gonadotropin,f-βhCG ELISA KIT ELISA.  96T/48T
人大內(nèi)皮素(BigET）Elisa檢測試劑盒 Human Big Endothelin,Big ET ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人全段甲狀旁腺素(i-PTH）Elisa檢測試劑盒 Human intact Parathormone ,i-PTH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人降鈣素(CT）Elisa檢測試劑盒 Human Calcitonin,CT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促甲狀腺素(TSH）Elisa檢測試劑盒 Human Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人*(Cortisol）Elisa檢測試劑盒 Human Cortisol ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌二醇(E2）Elisa檢測試劑盒 Human Estradiol,E2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S）Elisa檢測試劑盒 Human Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人睪酮(T）Elisa檢測試劑盒 Human Testoterone,T ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人游離睪酮(F-TESTO）Elisa檢測試劑盒 Human Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雄烯二酮(ASD）Elisa檢測試劑盒 Human Androstenedione,ASD ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌三醇(E3）Elisa檢測試劑盒 Human Estriol,E3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人17羥孕酮(17-OHP）Elisa檢測試劑盒 Human 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人三碘甲狀腺原氨酸(T3）Elisa檢測試劑盒 Human Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀腺素(T4）Elisa檢測試劑盒 Human thyroxine,T4 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲狀腺素(T4）Elisa檢測試劑盒 Human thyroxine,T4 ELISA Kit ELISA.  96T/48T