G418通過干擾核糖體的功能而阻斷細(xì)胞的蛋白合成
G418 G418是一種氨基糖苷類抗生素 ,這種氨基糖類抗生素的結(jié)構(gòu)和*、*、*相似，在分子遺傳試驗(yàn)中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的抗性篩選試劑。它通過抑制轉(zhuǎn)座子Tn601，Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對(duì)原核和真核等細(xì)胞產(chǎn)生毒素 ,包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞 ,也包括原生動(dòng)物和蠕蟲。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞DNA后 ,則能啟動(dòng)neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為ｍＲＮＡ ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有Ｇ418的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。Ｇ418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面得以廣泛應(yīng)用。
使用方法 室溫下運(yùn)輸, 干粉在室溫下儲(chǔ)存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃儲(chǔ)存 由于各真核細(xì)胞系對(duì)敏感度不同,各新細(xì)胞系或株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)殺死非穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞所需用量需要通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。zui適用量通過建立細(xì)胞死亡曲線獲得。將細(xì)胞稀釋至1000cell/ml，每孔100ul加入有培養(yǎng)基的24孔板，將每孔中的濃度稀釋至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12個(gè)級(jí)別, 培養(yǎng)10-14天，以zui低細(xì)胞全部死亡濃度為基準(zhǔn)，一般400-800左右，篩選時(shí)比該濃度再高一個(gè)級(jí)別，維持時(shí)使用篩選濃度的一半即可。
選擇濃度范圍
細(xì)胞系或機(jī)體 濃度（ug/ml）
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 700～800
Madin－Darby犬腎細(xì)胞 500
人上皮A431細(xì)胞 400
猿CV-1細(xì)胞 500
盤基網(wǎng)柄菌屬 10～35
植物 10
酵母 125～500
質(zhì)量指標(biāo) ：白色粉末，融點(diǎn)138～144℃，溶于水、甲醇。 CAS No.：108321-42-2
分子式 ：C20H40N4O10 •2H2SO4 分子量 ：692.71
結(jié)構(gòu)式 ：
比旋：+104o～+121o 水分：≤10% 吸光值：≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)
效價(jià)： >700 ug/mg
[儲(chǔ)運(yùn)] 室溫下運(yùn)輸, 干粉在室溫下儲(chǔ)存，溶液于-20℃儲(chǔ)存。
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