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微生物液體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

閱讀：323發(fā)布時(shí)間：2015-06-23

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過(guò)培養(yǎng)法
實(shí)驗(yàn)方法原理    
 
 
實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)菌
試劑、試劑盒    胰化蛋白胨酵母提取物氯化鈉NaOH
儀器、耗材    接種針培養(yǎng)瓶搖床
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  取5 ml 液體培養(yǎng)基加入一支無(wú)菌的16 mm 或18 mm 的培養(yǎng)試管中。 

2.  用接種環(huán)挑一個(gè)單菌落，浸沒(méi)于培養(yǎng)液中并輕輕振動(dòng)接種環(huán)，使待接種的細(xì)菌分散在培養(yǎng)液中。
 
3.  蓋好試管，在搖床或轉(zhuǎn)鼓式培養(yǎng)裝置上以60 r/min 速度。

4.  于37 ℃培養(yǎng)至飽和（約6 h）新鮮培養(yǎng)至飽和期的培養(yǎng)液細(xì)菌濃度大約為1X109~2X109細(xì)胞/ml。

大體積培養(yǎng)法

實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)菌
試劑、試劑盒    胰化蛋白胨酵母提取物氯化鈉NaOH
儀器、耗材    接種針培養(yǎng)瓶搖床
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  按1：100的比例將過(guò)培養(yǎng)物加入到一個(gè)無(wú)菌燒瓶中，燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。

2.  于37℃，約300 r/min 劇烈揺動(dòng)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)    
1.  如果不揺動(dòng)培養(yǎng)細(xì)胞，所用燒瓶的體積應(yīng)比培養(yǎng)液體積大20倍以上。

細(xì)菌培養(yǎng)的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)菌
儀器、耗材    顯微鏡玻片蓋玻片滴管
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、利用計(jì)數(shù)板檢測(cè)
 
1.  用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計(jì)數(shù)玻片或者petraff-Hausser小室，參見(jiàn)下面。


2.  用含少量培養(yǎng)液的吸管接觸蓋玻片的邊緣。
 
3.  在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個(gè)小方塊中所見(jiàn)的每個(gè)細(xì)菌大約相當(dāng)于2×107細(xì)胞/ml，計(jì)算濃度。

二、利用分光光度計(jì)檢測(cè) 

1.  稀釋培養(yǎng)液至OD600＜1。

2.  按每0.1OD值大約相當(dāng)于108細(xì)胞/ml計(jì)算細(xì)菌濃度。


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