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技術文章

吉姆薩染色實驗

閱讀:285發布時間:2015-6-10

實驗材料    原位雜交玻片
試劑、試劑盒    吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯
儀器、耗材    染色盤培養箱濾紙
實驗步驟    
1.  將顯影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盤中。

(1)1個盤:pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液,所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。

(2)3個盤:水。

(3)脫水系列溶液:

①3個盤:分別盛50%、70%和95%乙醇。

②2個盤:盛有100%乙醇。

③3個盤:盛有二甲苯。
 
3.  在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s(依染色時間決定染色的強弱),將玻片在水中浸泡3次,每次2 min。

4.  連續用乙醇脫水系列溶液處理,每盤中浸泡2 min,將玻片移至二甲苯盤中,毎次浸泡2 min,共3次。
 
5.  在通風櫥中,按如下操作壓片固定:用一平頭鑷(拿在左手),從二甲苯中取出一塊玻片,夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端(切片所處位置),左手拿一干凈的蓋玻片,很緩慢地放在載玻片上(在加壓片固定介質和蓋玻片前,勿使玻片變干,因微小氣泡會造成人為假象)。
 
6.  用3MM 濾紙,沿蓋玻片邊緣,小心吸去多余固片介質/二甲苯,并擦拭載玻片背面(勿擦拭蓋玻片)。
 
7.  將玻片平放于一硬紙盒盤上,置42℃溫孵箱2天使之凝固。
 
8.  以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳,染料及固片介質。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒,必要時,載玻片上再注明標簽。

9.  顯微鏡觀察玻片,觀察時可依信號強弱,調節光亮。
收起 
注意事項    
1.  勿將玻片直立存放于玻片中,因此時固片介質尚未凝結。


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