實驗方法原理 在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態。農桿菌的感受態可用CaCl2處理而誘導產生。將正在生長的農桿菌細胞加入到低滲的CaCl2溶液中，0℃下處理便會使細菌細胞膜的透性發生改變，此時的細胞呈現出感受態。制備好的農桿菌感受態細胞迅速冷凍于-70℃可保存相當一段時間而不會對其轉化效率有太大的影響。
實驗材料 土壤農桿菌LBA4404菌株
試劑、試劑盒 YEB液體培養基酵母提取物牛肉膏蛋白胨蔗糖*氯化鈣*儲液
儀器、耗材 超凈工作臺恒溫搖床冷凍高速離心機高壓滅菌鍋冰箱超低溫冰柜分光光度計接種針試管離心管離心管冰浴微量進樣器吸頭
實驗步驟
一、實驗儀器、材料和試劑
1. 儀器
超凈工作臺，恒溫搖床，冷凍高速離心機，高壓滅菌鍋，冰箱，-70℃超低溫冰柜，分光光度計，接種針，10ml試管，50ml離心管，1.5ml離心管，冰浴，微量進樣器及吸頭。
以上玻璃儀器和離心管需在用前滅菌，滅菌條件：120℃，15分鐘。
2. 材料
土壤農桿菌LBA4404菌株或其它農桿菌菌株
3. 試劑
（1）YEB液體培養基（1 L）：酵母提取物1 g，牛肉膏5 g，蛋白胨5 g，蔗糖5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，pH7.0，高壓滅菌。
（2）*（Rif）儲液：50 mg/ml
（3）20 mM CaCl2，高壓滅菌。
二、實驗步驟
1. 挑取根癌農桿菌LBA4404單菌落于3 ml的YEB液體培養基（含Rif 50 mg/l）中，28℃振蕩培養。
2. 取培養菌液1 ml接種于50 ml YEB（Rif 50 mg/l）液體培養基中，28℃振蕩培養至OD600為0.5。
3. 取2 ml菌液，13 000 rpm，離心30 sec，棄上清。
4、加入1000 μl 20 mM CaCl2，使農桿菌細胞充分懸浮，冰浴30 min。
5、13 000 rpm，離心30 sec，棄上清，置于冰上，加入500 μl預冷的20 mM CaCl2，充分懸浮細胞，冰浴中保存，24 hr內使用，或液氮中速凍1 min，置-70℃保存備用。
電轉農桿菌感受態
實驗材料 農桿菌菌種
試劑、試劑盒 HEPESNaOH*甘油
儀器、耗材 離心管離心機制冰機
實驗步驟
一、試劑配制
1 mM HEPES的配制：稱取0.119 g HEPES（MW 238.3）粉末，加水溶解，定容至500 ml，用NaOH調pH至7.0，滅菌后待用。
二、實驗步驟
1. 挑取單克隆接種于2 ml YEP（含50 mg/l*）液體培養基，28℃，250 rpm，振蕩培養。（如用5 mlYEP，需培養36 h）
2. 將菌液按1:100轉移至200 ml YEP（含50 mg/l*）培養液中，28℃，250 rpm，振蕩培養至OD=0.3(約4~5 h)。
3. 轉入50 ml的無菌離心管，4℃，4 000 rpm離心10 min，棄上清。
4. 用20 ml冰浴的HEPES(1 mM，PH7.0)重懸。
5. 4℃，4 000 rpm離心10 min，棄上清。
6. 重復4、5步驟2~3次。
7. 用2 ml冰浴的10%甘油重懸。
8. 每管100 μl分裝于1.5 ml無菌的Eppendorf管中，-70℃保存。
