特異性細胞免疫是由T細胞介導(dǎo)的，因此，細胞免疫檢測通常是檢查T細胞的數(shù)量、功能及其產(chǎn)物如細胞因子等，是了解機體細胞免疫狀態(tài)的重要手段。
一、淋巴細胞的分離
細胞免疫檢測首先要從人或動物血液及組織中分離出活的淋巴細胞。分離淋巴細胞的方法有多種，目前常用Ficoll密度梯度離心法直接分離外周血單個核細胞。
分離人外周血單個核細胞（PBMC）的分層液是比重1.077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-*(Urografin)(F/H)分層液。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外周血中分離到單個核細胞。
【材料】肝素抗凝人血、淋巴細胞分層液、無Ca2+ 、Mg2+ hanks液、離心管、試管、吸管、毛細管、*。
【方法】
（1）采取新鮮靜脈血2ml，加入含0.1ml肝素（50單位）的試管中，加2mlhanks液混勻。
（2）用滴管將稀釋過的血液沿管壁緩慢加入2ml細胞分層液的液面上（分層液與稀釋血液體積比例為1：2），注意兩者不能混合，保持界面清楚，用水平離心機以2000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，離心完，可見紅細胞沉降至zui下層，上層為血漿，中層為分層液，血漿與分層液的界面有一比較清楚的乳白色淋巴細胞和單核細胞層細胞免疫檢測技術(shù)（見圖4-1）。用毛細滴管吸取該層，置含有1滴肝素及5倍以上體積無Ca2+ 、Mg2+ Hanks液的試管中，以2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，棄上清液后，以同樣試液再洗滌一次。
（3）盡量吸去上清液，將沉于管底的細胞沉積塊搖散，加Hanks液至1ml作細胞計數(shù)，用Hanks液配成2×106細胞/ml的細胞懸液。
二、E花環(huán)形成試驗（erythrocytc rosette forming test）
人類T淋巴細胞表面CD2分子是綿羊紅細胞（SRBC）受體，也稱E受體，在一定條件下，SRBC環(huán)繞T細胞與之結(jié)合，形成花環(huán)狀，稱E花環(huán)（E-rosette），形成此種花環(huán)的細胞稱E花環(huán)形成細胞（簡稱E-RFC）。
E花環(huán)試驗可用作人外周T細胞的分離與鑒定。
【材料】淋巴細胞懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。
【方法】
（1）取上述配好之淋巴細胞懸液0.1ml于潔凈小試管中，加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混勻，置37℃水浴箱中5分鐘，500轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，放4℃冰箱2-24小時。
（2）從冰箱中取出試管，留適量上清液，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛2滴，輕搖后，置4℃冰箱15分鐘，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。
（3）計數(shù)：鏡下觀察，凡結(jié)合三個以上SRBC的T細胞即為E-RFC，計數(shù)200個淋巴細胞，求出E-RFC占淋巴細胞總數(shù)的百分率。
【結(jié)果】
一般認為E-RFC的正常值在60％以上，如少于50％則為低下。如欲分離T細胞，可用密度梯度離心，E-RFC因比重增大而沉于管底，與其他細胞分離；用低滲法裂解花結(jié)中的SRBC，即可獲得純化的T細胞。
三、淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（微量全血法 ）
T細胞在體外培養(yǎng)時，當受到非特異性的有絲分裂原（PHA）刺激后可轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，并進行有絲分裂，轉(zhuǎn)化的淋巴母細胞，在形態(tài)上出現(xiàn)了幼稚化，光鏡下很容易識別，可通過淋巴細胞轉(zhuǎn)化率反映機體T細胞免疫功能。此試驗也可用3H-TdR摻入法或MTT法定量檢測。
