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豬白細胞介素-15(IL-15)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-05-25 21:59:00瀏覽次數:270次

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豬白細胞介素-15(IL-15)ELISA試劑盒

規格:48T/96T

樣本:體液,血清,血漿,細胞培養上清液,尿液,組織勻漿,心房水標本等
所需樣本體積: 50-100ul
反應時間: 1-5h
檢測波長: 450 nm
檢測方法:酶聯免疫法/酶免法(ELISA
用途: For research use only. Not for diagnostic use.(只能用于科研,不可用于臨床診斷)

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豬白細胞介素-15(IL-15)ELISA試劑盒

一、雙抗體夾心法

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

二、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;

2.次日洗滌3次;

3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;

5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

6.zui后一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

豬白細胞介素-15(IL-15)ELISA試劑盒

血清:全血標本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。血漿:抗凝劑*使用EDTA,標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂標本。其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20/-80℃電冰箱內,避免反復凍融,6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建議先做預實驗,以確定稀釋倍數)。
酶標儀(450nm波長濾光片)高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水。

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