由于此質(zhì)體為multiple copies，一般大腸桿菌菌株中l(wèi)ac repressor的含足以有效地進調(diào)控，縱使未加入inducer，也會有外源蛋白質(zhì)的表現(xiàn)，萬一外源蛋白質(zhì)對寄主造成毒害，使的無法生長，我們可能表現(xiàn)質(zhì)體無法選殖到，無法達成我們的實驗目的。 我們所選用的寄主菌株JM109 所具有的 lacIq，能夠過表現(xiàn) （overproduce） lac repressor，因此可較有效地控制T5 promoter的啟動。 然而，是JM109 這一類帶有l(wèi)acIq的菌株發(fā)生問題時，就必須再換其它的寄主菌株；如M15[pREP4]，此菌株除染色體上的lacI基因外，還帶有能持續(xù)表現(xiàn)lacrepressor的質(zhì)體，應可解決lac repressor 足的問題。
檢定載體上是否接上外的DNA 段，常因質(zhì)體同而有同方法，一般常用外DNA 片段的插入導致載體某表現(xiàn)形的喪失 （insertional inactivation） 作為篩選的依據(jù)；或者可用插入的DNA 上帶有宿主所缺少的表現(xiàn)型進篩選。載體與插入DNA 皆無適當?shù)暮Y選依據(jù)，則可將菌中的質(zhì)體抽出后，以限制酶作用后進電泳分析。而我們實驗中所用的質(zhì)體pQE31，并沒有簡快速篩選重組質(zhì)體的方法可用，因此需要用GUS 的抗體進colony hybridization，尋找可表現(xiàn)出GUS的轉(zhuǎn)形株；或在培養(yǎng)基中加入GUS 的基質(zhì)，轉(zhuǎn)形株可表現(xiàn)出GUS，則可將基質(zhì)分解使菌呈現(xiàn)藍色；或以質(zhì)體快速抽取法，篩選帶有正確分子質(zhì)體的轉(zhuǎn)形株。 三種方法請練習，得到的正反應株均必須再抽取質(zhì)體進限制酶分析，以進一步確認質(zhì)體的正確性。