小鼠畸胎瘤細胞(P19)
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞介紹
加拿大渥太華大學的Me Burney等在1982年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的,是一種能夠在體外培養(yǎng)的多能干細胞,P19細胞團經(jīng)RA誘導可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞和纖維母細胞;而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO)誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經(jīng)元分化的過程中,神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達模式 基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過程,因此,P19目前被用作一個研究神經(jīng)發(fā)育的 體外模型。P19細胞作為研究神經(jīng)分化機制的模型,顯著區(qū)別于其他細胞系的四 大特點是:①它具有正常小鼠的二倍體核型,細胞分裂快,可在體外迅速大量擴 增,多次傳代也不喪失其分化能力。②P19細胞具有多種分化潛力,不同誘導條 件下可定向分化成不同類型的細胞,種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。 ③根據(jù)P19細胞誘導分化分階段進行的特點,能將神經(jīng)分化的早期機制與參與 突起延伸的機制分開研究。④該細胞易于轉(zhuǎn)染,且轉(zhuǎn)染后仍能正常分化,適于進 行細胞基因研究。通過轉(zhuǎn)染正常或突變的目的基因,增強或抑制它們的表達水平 可用于研究這些基因在神經(jīng)分化中的作用。另外,利用反義RNA阻斷內(nèi)源蛋白 的表達,可用來觀察這些蛋白在神經(jīng)分化中的作用。
(references:1.張金平等.全反式維甲酸體外誘導P19細胞向心肌方向分化.[」]中國組織化學與 細胞化學雜志.2012.12.梅宇欽等.建立經(jīng)優(yōu)化的促P19鼠胚胎癌細胞神經(jīng)分化模型.浙江大學學報(醫(yī) 學版)2012.04)
小鼠畸胎瘤細胞(P19)
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1.準備MEMa培養(yǎng)基(MEMa+培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11900024,添加NaHC〇31.5g八,肌醇43.2mg八,*8.82mg八,0-巰基乙醇7.8mg八),90%; BCS,7.5%;胎牛血清,2.5%。
2. 培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢 查細胞密度。
細胞特性
1)來源:胚胎;崎胎癌
2)形態(tài):上皮細胞樣
3)含量:>lxl06個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后 立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細 胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途:僅供科研使用。
小鼠畸胎瘤細胞(P19)
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2■加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加 入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍 存。
注意事項:
收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。