人腎胚瘤細胞(G-401)細胞介紹:
G-401細胞來源于韋爾姆斯氏瘤,該細胞表達成腎細胞生長因子。
細胞特性:
1)來源:腎臟
2)形態:上皮細胞樣,貼壁生長
3)含量:>lxl06 個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存:使用T25瓶充液發送活細胞。收到細胞后,請先在顯微鏡下檢查細 胞生長狀態,并將T25瓶置于培養箱約6h或過夜后,再次檢查細胞狀態。若狀態良好,可按照以下細胞培養步驟進行細胞后續處理操作。若發現可疑污染物,請及時與我們取得。
人腎胚瘤細胞(G-401)細胞培養步驟:
1)培養基及培養凍存條件準備:
1.準備 McCOY's 5A 培養基(McCOY's 5A,SIGMA,貨號 M4892,添加 NaHC03 2.2g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2.培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理:
復蘇細胞:將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
人腎胚瘤細胞(G-401)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37°C培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約lml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加1〇%DMSO后進行凍存。
注意事項:
收到細胞后,若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
人腎胚瘤細胞(G-401)細胞用途:僅供科研使用。