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血清是zui常用的ELISA標本,血漿一般可視為與血清平等的標本,標本引起的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質所造成的,分為內源性物質和外源性物質兩種:
1.內源性物質有人以為大約40%的人血清標本中含有非特異性攪擾物質,能夠不同程度影響檢測成果。常見的攪擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、穿插反響物質和其它物質等。
(1)類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,然后導致假陽性。
處理該狀況的辦法是:
①用F(ab)2代替完好的IgG;
②標本用聯有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中相同有效);③檢測抗原時,能夠用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體ELISA體系中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發作變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被露出出來,使C1q能夠將二者連接起來,然后構成假陽性。處理的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來,也能構成假陽性。處理的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量缺乏或亞類不一起無效。
(4)嗜靶抗原的本身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時能與靶抗原結合構成復合物,在ELISA辦法中均可攪擾抗原抗體測定成果。為防止以上狀況呈現,處理的辦法是:測定前需用理化辦法將其解離后再測定。
(5)醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體臨床標本展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫治,用放射性同位素標記鼠源性抗體的印象確診及靶向醫治等新技術,均有可能使這些患者體內發生抗鼠抗體;別的,被鼠等嚙齒類動物咬傷的患者體內也能夠發生抗鼠Ig(s)抗體。這些患者ELISA測守時均可發生假陽性。處理的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig(s),然后戰勝因為上述原因構成的假陽性。
(6)穿插反響物質類、類AFP樣物質等,是與靶抗原有穿插反響的物質。在用多抗測定抗原時對測定成果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,假如穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會呈現假陽性成果。
(7)標本中其它成分的影響血清脂質過高、*、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定成果有攪擾效果。
2.外源性物質
外源性物質常常是因為用于ELISA測定的血標本的采集、儲存等不妥所造成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝集不全和*中添加物等影響。
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