固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗刷操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分別開來,以保證ELISA測定的特異性。因而,洗板關于ELISA測定來說,也是極點要害的一步。
以HRP作為符號酶的ELISA試劑盒中運用的洗板液一般為含0.05%Tween20的中性PBS,Tween20為一種非離子去垢劑,既含親水基團,也含疏水基團,其在洗刷中的作用機理是,憑仗其疏水基團與經疏水性彼此作用吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基團構成疏水鍵,然后削弱蛋白與固相的吸附,一同在其親水基團與液相中水分子的結合作用下,促進蛋白質脫離固相而進入液相,這樣就可抵達去掉非特異吸附物的目的,但由于抗體或抗原的包被一般也是通過在堿性條件下與固相的疏水性彼此作用而吸附于固相,因而要注意非離子去垢劑的運用濃度,洗板液中Tween20濃度高于0.2%,可使包被于固相上的抗原或抗體解吸附而影響實驗的測定下限。
在實驗室中,ELISA試劑盒測定的洗板一般有兩種辦法,即手工和洗板機洗板。手工洗板就是在每次反應溫育后,將反應液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2~3分鐘后,將洗液吸出或甩干,再在吸水紙上拍干。重復上述洗刷過程3~4次,終究在吸水紙上拍干,即可進行下一步測定操作。洗板機洗板則是將上述手工操作改由洗板機進行,運用洗板機洗板的一個特點是,每次洗板后不能拍干,故有較多的液體殘留,液體殘留量小的洗板機洗板至*所需的次數要少于殘留量大的洗板機。在特定臨床實驗室所運用的洗板機,終究洗多少次能抵達要求,可進行下面這個簡略的實驗:挑選4×8 HBsAgELISA包被板條,每2×8孔分別參與相同一份弱陽性和一份陰性樣本,按試劑盒說明參與酶結合物并結束溫育后,洗板孔時按*排4孔洗1次、第二批4孔洗2次、第3排4孔洗3次——直至第8排4孔洗8次,加底物顯色測定,如洗3次后,顯色不再改變,即洗3次的板孔比色測定與4次、5次洗板的板孔的吸光度等相同,陽性/陰性值堅持zui大不變,則可以斷定該實驗室所用洗板機3次洗板即可抵達要求。
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