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上海酶聯生物研究所

操作ELISA試劑盒試驗中的各項細節

時間:2020-5-15閱讀:529
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細節決定勝敗,這對于試驗室科研工作者來說也是如此。在ELISA試劑盒試驗中的各項操作細節有許多,如盡量少用排槍、勤換槍頭,加樣時由低濃度向高濃度加,因為這樣可以削減跳孔的幾率。而整個試驗的*后要害就是成果的處理辦法了,那么在在今天的技術文章中,為您帶來的是ELISA試劑盒檢測成果剖析辦法。

①:ELISA試驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度規范品的均勻OD值,復孔的變異系數應該小于20%。

②:均勻OD值減去空白孔的OD值。

③:制造規范曲線。

以減去本底后的OD值為X軸,規范品的濃度為Y軸,運用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。建議運用適宜的軟件來作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件可以給出許多種辦法(比如直線、半對數、對數、四參數方程等)并從中選擇一條*適宜的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數據符合,可以將規范品的濃度作為未知數,將對應的OD值帶入該方程,計算出規范品的濃度,得到的成果應該與實踐濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度的那條曲線。

假如呈現規范曲線的線性欠好,或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值差別很大),或呈現跳孔的現象,或許引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能趕快進行下一步操作、增加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育方位避光性欠安或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸騰、酶標板孔問參加的試劑量不同,

相對應的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中,人工洗板時也請小心,勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、增加試劑時請懸空滴入,切記勿將槍頭接觸到板孔內,汲取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、確認孵育環境不透光,蓋板膜將酶標板密封好、運用已校正過的微量加樣器,如將次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下,那么將以后槍頭上留有的液體也滴下,以保證參加液體體積的一致性。

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