當前位置:上海酶聯生物研究所>>技術文章>>我司講堂:培養細胞樣品怎么處理?
酶聯免疫試驗簡稱Elisa試驗,是elisa試劑盒樣本前處理是酶聯免疫試驗中要害的一步,稍有不小心將導致試驗滿盤皆輸,怎么安全,便利的處理樣本,接下來我公司就和大家共享樣本處理的辦法
1. 融解RIPA裂解液,混勻。取恰當量的裂解液,在運用前數分鐘內參加PMSF,使PMSF的*終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(假如血清中的蛋白沒有干擾,能夠不洗)。依照6孔板每孔參加150-250微升裂解液的比例參加裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充沛觸摸。一般裂解液觸摸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
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3. 充沛裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
對于安排樣品:
1. 把安排剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混勻。取恰當量的裂解液,在運用前數分鐘內參加PMSF,使PMSF的*終濃度為1mM。
3. 依照每20毫克安排參加150-250微升裂解液的比例參加裂解液。(假如裂解不充沛能夠恰當增加更多的裂解液,假如需要高濃度的蛋白樣品,能夠恰當減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充沛裂解。
5. 充沛裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 假如安排樣品本身非常細小,能夠恰當剪切后直接參加裂解液裂解,經過激烈vortex使樣品裂解充沛。然后同樣離心取上清,用于后續試驗。直接裂解的優點是比較便利,不必運用勻漿器,缺陷是不如運用勻漿器那樣裂解得比較充沛。
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