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確定有無凋亡可用Annexin v-PI 雙染,因為該方法對早期凋亡比較敏感,如果沒測出明顯的凋亡,換別的也可能測不出。
用Annexin v-PI 雙染測出凋亡后,可根據標本或樣品情況選擇其它的方法來驗證,但我認為這并不是必須的,很多高質量的paper也只用一種方法測凋亡。當然你也要根據你下一步的實驗需要,如果你想進一步確定該凋亡是線粒體途徑還是死亡受體途徑,你可以檢測相應的caspase或選擇線粒體途徑的試劑盒等等。
zui簡單的是形態學的檢測,Hoechst染色,用熒光顯微鏡觀察,很便宜,200多塊買的染料,做到死也用不完,加上如果你的凋亡形態好,出的圖像也漂亮,周期也短,很直接就可以看到結果。還有大家都選擇的是DNAladder,步驟是很簡單,不過要想真的做出漂亮的LADDER可能還需要下不少的功夫,還有一種是流式細胞來檢測,也不算貴,這三種應該都是用的非常多的。
細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態學改變分為三期:
Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質出現濃縮狀態;
Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;
Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體
正常細胞和早、中期調亡細胞均可被Hoechst著色。
正常細胞核的Hoechst著色的形態呈圓形,淡蘭色,內有較深的藍色顆粒;
調亡細胞核由于濃集而呈亮蘭色,或核呈分葉,碎片狀。
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