培養基生產和使用常見問題

培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。培養基種類很多，根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基；根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基；根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等；根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。培養基配成后一般需測試并調節pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由于富含營養物質，易被污染或變質。配好后不宜久置，現配現用。

1.低血清培養基能用肉眼判斷其pH值嗎？
答：低血清培養基中酚紅的含量與普通培養基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。

2.低血清培養基的緩沖系統是什么？

答：平衡鹽一般是由無機鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統、Earle′s系統、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統等。199系列培養基、MEM系列培養基均有Hanks′系統的培養基及Earle′s系統的培養基。但是有些培養基均不是以上常規的平衡鹽系統，例如RPMI 1640培養基、F12培養基。MEM(SLM)低血清培養基的平衡鹽系統也不是常規的平衡鹽系統，該平衡鹽系統的緩沖能力強于常規平衡鹽系統的緩沖能力。

3.*溶液和*的配制方法是什么？

答：以0.2mol/L的 L-*配制為例：稱取L-*2.92g，加注射用水100ml，充分攪拌混勻。用0.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應在4℃下避光保存，2周內使用。以7.5% NaHCO3的配制為例：稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。

4.什么培養基中可以省去加酚紅？

答：酚紅在培養基中用作pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產生影響，可以通過純化技術去除，但酚紅在無血清培養基可能帶來胞內鈉/鉀失衡，影響細胞生長，當然這種作用能被血清所中和或減輕。 酚紅并不是培養基中必需的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產企業在生產過程中都使用無酚紅培養基。

5.放置在冰箱中的培養基顏色會發生變化，為什么？

答：培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO2 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長停滯或死亡。培養基偏堿時，可以通入無菌過濾的CO2，以調整pH值。

6.無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？

答：當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會結合和滅活一些抗生素。而在無血清培養條件下，抗生素不被滅活。