培養(yǎng)基生產(chǎn)和使用常見(jiàn)問(wèn)題

培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物（或組織）生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來(lái)源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等；根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測(cè)試并調(diào)節(jié)pH，還須進(jìn)行滅菌，通常有高溫滅菌和過(guò)濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.低血清培養(yǎng)基能用肉眼判斷其pH值嗎？
答：低血清培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過(guò)肉眼觀察或通過(guò)經(jīng)驗(yàn)來(lái)判定pH值，建議使用pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定。

2.低血清培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)是什么？

答：平衡鹽一般是由無(wú)機(jī)鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統(tǒng)、Earle′s系統(tǒng)、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統(tǒng)等。199系列培養(yǎng)基、MEM系列培養(yǎng)基均有Hanks′系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle′s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。但是有些培養(yǎng)基均不是以上常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI 1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。

3.*溶液和*的配制方法是什么？

答：以0.2mol/L的 L-*配制為例：稱取L-*2.92g，加注射用水100ml，充分?jǐn)嚢杌靹?。?.2μm濾膜正壓過(guò)濾除菌。溶液應(yīng)在4℃下避光保存，2周內(nèi)使用。以7.5% NaHCO3的配制為例：稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過(guò)濾除菌。

4.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？

答：酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。酚紅本身對(duì)生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響，可以通過(guò)純化技術(shù)去除，但酚紅在無(wú)血清培養(yǎng)基可能帶來(lái)胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長(zhǎng)，當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。 酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分，很多國(guó)外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程中都使用無(wú)酚紅培養(yǎng)基。

5.放置在冰箱中的培養(yǎng)基顏色會(huì)發(fā)生變化，為什么？

答：培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)CO2 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿后再用于細(xì)胞培養(yǎng)將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾的CO2，以調(diào)整pH值。

6.無(wú)血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？

答：當(dāng)在無(wú)血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí)，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。因?yàn)檠逯械牡鞍讜?huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。而在無(wú)血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活。