雌二醇Elisa試劑盒的原理及操作步驟
雌二醇Elisa試劑盒中的雌二醇是卵巢分泌的類固醇激素，是主要的雌性激素，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)女性特征、附屬性器官的成熟和月經(jīng)-排卵周期，促進(jìn)乳腺導(dǎo)管系統(tǒng)的產(chǎn)生，雌二醇是人體一種重要的黃體解體劑，雌二醇主要是卵巢濾泡和胎盤的睪酮合成的，在腎臟也能合成少許，睪酮與雌二醇的轉(zhuǎn)換是芳香酶系統(tǒng)完成的，血漿中雌二醇是一種動態(tài)過程。

將雌二醇抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的雌二醇與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入*化的雌二醇抗體，將未結(jié)合的*化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度，計(jì)算樣品濃度。

加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于雌二醇Elisa試劑盒中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌，同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔。
用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/毫升。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過一夜。次日棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。
加酶標(biāo)抗體于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1毫升。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
終止反應(yīng)于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05毫升。