當前位置:上海酶聯生物研究所>>技術文章>>收到細胞后的培養方法
1、收到細胞,請檢查瓶子是否有決裂,培育基是否漏出,是否污濁,如有請趕快聯絡。
2、收到細胞,如包裝無缺,請在顯微鏡下調查細胞。,因為運送過程中的問題,細胞培育瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中掉落下來,顯微鏡下調查會呈現細胞懸浮的狀況,呈現此狀況時,請不要翻開細胞培育瓶,先不要把培育基吸出來。應立即將培育瓶置于細胞培育箱里停止3-5小時左右,讓細胞先穩定下,再于顯微鏡下調查,此刻大都細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法判定細胞生機,如臺盼藍染色證實細胞生機正常請按懸浮細胞的方法處理
3. 收到細胞時如無異常狀況 ,請在顯微鏡下調查細胞密度,如為貼壁細胞,未超越80%匯合度時,用75%酒精(主張裝備75%酒精的水也是滅菌超純水。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴厲無菌操作:然后翻開蓋子,先用槍頭把培育基吸出10ML左右,放在離心管里,然后瓶口過火,(禁止直接傾倒),這樣能夠保證不污染,再用10ML的移液管,將剩下的培育基悉數吸出,放于離心管中,培育瓶中只剩下5-10ML左右培育液持續培育就能夠了):超越80%匯合度時,請按細胞培育條件傳代培育。
如為懸浮細胞,吸出培育液,1000轉/分鐘離心3-5分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培育基懸浮細胞后移回培育瓶。
4,將培育瓶置于37℃培育箱中培育,蓋子悄悄擰松。吸出的培育基能夠保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。第二天換液時,要制造新鮮的培育基和進口胎牛血清。這樣對細胞成長更好。不要再用咱們原瓶的培育基了。
5 、24小時后,細胞形狀已康復并貼滿瓶壁,就能夠傳代了。(貼壁細胞)將培育瓶里的培育基倒去,加3-5ml(以能掩蓋細胞成長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的*消化,消化時刻以詳細細胞為準,一般1-3分鐘,不超越5分鐘。能夠放入37℃培育箱消化。悄悄晃動瓶壁,見細胞掉落下來,參加3-5ml培育基停止消化。用移液管悄悄吹打瓶壁上的細胞,使之*掉落,然后將溶液吸入離心管內離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數量決議分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些成長較快的細胞則能夠多傳幾瓶,以詳細細胞和經歷為準。(懸浮細胞)用移液管悄悄吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴厲無菌操作。換液時,換新的細胞培育瓶和換新鮮的培育液和進口胎牛血清,37度 5%CO2 培育
7. 收到細胞后,請鏡下調查細胞,用恰當方法處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心搜集細胞,接種到一個新的培育瓶中。棄掉原液,運用新鮮制造的培育基,運用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度能夠加到15%去培育。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度仍是在10%。
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