當前位置:上海酶聯生物研究所>>技術文章>>ELISA試劑盒實驗操作注意事項如下
檢測成果牢靠的必要條件。如不留意,就易呈現白板、花板、色弱和假陽性等現象。尤其是花板現象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內質控孔成果正常,而標本孔的OD值卻顯著偏高)是各個廠家洗板機調試中常常遇到的問題。以期給我們帶來一些啟發,以改進洗板機的裝置調試水平,進步臨床檢測質量。也有廠家堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學地對待反響成果。
基因工程抗原較組成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA 試劑盒來講,ELISA試劑盒靠前代產品為組成肽抗原,主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產品包被的抗原既有基因工程抗原又有組成肽,僅僅其時的基因工程抗原不全,僅包含了HCV 的核心區片段;第三代產品基本上采用了基因工程抗原,并且這些抗原包含更多、更安穩、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大進步了。
基因工程抗原與組成肽抗原的差異如下:
a,要留意防止呈現嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。
b,冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等造成的重復凍融。ELISA試劑盒標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生損壞效果,然后引起假陰性成果。此外,凍融標本的混勻亦應留意,不要進行劇烈振動,重復倒置混勻即可。
c,樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染,一則細菌的成長,其所排泄的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發生分解效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會對用相應酶作符號的測定辦法發生非特異性干擾。
d,血清標本如是以無菌操作別離,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長期保存,應在-70℃以下。
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