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一、ELISA試劑盒概念及前史
ELISA(Enzyme-linked Immunosorbent assy),中文名:酶聯免疫吸附試驗。1971年由瑞典學者Ergvail和Perlmann,荷蘭Van Weerman和Schuurs等人發明,時至今日ELISA技術已經成為免疫學中zui為經典的技術之一。其基本原理是將抗原/抗體固定在固相載體上,通過抗原抗體結合特性,由酶介導催化擴展信號,通過對信號值記錄剖析進行待檢物的測定(現在首要用酶標板)。酶的催化功率很高,所以ELISA系統的高靈敏性是其廣受歡迎的重要原因;對檢測成果更高靈敏度一直是業界科研工作者孜孜不倦的尋求,人們一直在尋找新的擴展信號出現系統,新的檢測信號接收擴展核算儀器,但是就現在來說HRP-TMB系統仍然是干流,OD450/OD630酶標儀仍然是首要檢測儀器,其他系統因各自的缺陷運用較少。
現在,ELISA相關試劑和耗材都已經商品化,科研工作者運用起來都很便利。ELISA的首要流程如下:包被(抗原或抗體固相化),封閉,洗刷,加樣洗刷,加底物,讀數。下文介紹其分類及原理。
二、ELISA分類及其原理示意圖
ELISA根據不同標準,其分類方法也不盡相同,本文根據其操作流程不同將其分為四類:直接ELISA、直接ELISA、夾心ELISA和競賽克制ELISA。
1. 直接ELISA試劑盒:所謂直接ELISA就是指抗原(Antigen,簡寫Ag)包被于固相載體,封閉后參與酶符號抗體,洗去未結合的酶標抗體,參與底物顯色,顯色深淺與包被抗原量和酶標抗體量成正比。所謂的“直接”是指在固相載體上參與酶標抗體之后,直接加底物顯色,直接是指引入酶的進程是否“直接”。此為zui簡略的ELISA,常用于抗原活性檢測或符號抗體的效價和質量的檢測。
2. 直接ELISA
直接ELISA與直接ELISA的區別是抗原包被于固相載體后,不是直接加酶標抗體,而是先加抗體,洗刷后再參與酶標的抗抗體(酶標二抗),然后洗刷參與底物顯色。所謂直接和直接是針對酶標抗體是“直接”還是“直接”引入的而言的,引入了酶標二抗后檢測信號將擴展數十倍。
直接ELISA首要適用范圍:抗體效價檢測,單抗挑選,臨床上許多定性檢測等,直接ELISA應用十分廣泛,也是zui重要的一種ELISA。
3. 夾心ELISA試劑盒
夾心ELISA是把待檢物放中心,結構上像三明治,英文名又稱sandwich ELISA。夾心ELISA分為直接夾心ELISA和直接夾心ELISA; 直接夾心ELISA又分為雙抗體夾心ELISA和雙抗原夾心ELISA。
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