ELISA試劑盒實驗系統里地滴定其作業濃度。
酶的底物及供氫體的選擇：ELISA試劑盒對供氫體的選擇懇求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。
有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應留心防護。
選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于大都蛋白質來說通常為1～10μg/ml。
有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體。底物作用一段不論何種載體，在運用前均可進行選擇：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，查詢其顯色反應是不是均一性，據此判明其吸附功能是不是杰出。
包被抗體的選擇：ELISA試劑盒將抗體吸附在固相載體表面時,懇求純度要好,吸附時通常懇求PH在9.0～9.6之間。
ELISA試劑盒中，各首要構成試劑的選擇留心事項其間包括:
固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
然后再固定其它條件或選用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不一樣的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后，在其它實驗條件相一同，查詢陽性標本的OD值。
酶符號抗體作業濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行開端效價的滴定(見酶符號抗體部份)。
時間后，應參與強酸或強堿以停止反應。
通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。
ELISA試劑盒底物運用液有必要新鮮制作，尤其是H2O2在臨用前參與。